简介:摘要CRISPR/Cas9是近年来发展起来的一种非常高效的基因组定点编辑技术。然而,很多研究表明设计的单一向导RNA(SingleguideRNA,sgRNA)通常会与基因组DNA发生一定概率的序列错配,从而引起非预期的基因组编辑,即所谓的脱靶效应(Off-targeteffects)。脱靶效应是制约CRISPR/Cas9基因编辑技术得以迅速发展的重要掣肘,CRISPR/Cas9脱靶检测则成为降低脱靶率的重要前提,引起了很多科学工作者的关注。本文将重点介绍现行的几种脱靶检测方法,并对其原理进行分析与对比研究。
简介:目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9?MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9?MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228bpMAD2L1PCR产物,可被酶切成166bp和62bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。
简介:摘要:水泥是建筑工程中最常见、最普遍、应用最为广泛的材料,在具体施工中可以同砂石和水进行混合,从而形成水泥混凝土在建筑施工中进行应用。目前,在社会经济发展的推动下,我国的建筑行业也有了长足的进步,使得水泥混凝土的应用越来越广泛,这主要取决于水泥混凝土建筑施工中,其具有的极强耐磨性、抗压性以及耐热性等优点,这些优点可以使得这些材料,更好地适用于建筑行业的发展。而水泥作为建筑水泥混凝土的主要原料,在建筑施工的整体质量中有着举足轻重的作用,为了有效保证整体的建筑质量,就需要在检测环节提升对水泥质量的检测力度,这也是当前建筑行业发展中的一项重要研究课题。关键词:建筑工程;水泥检测;要点