简介:摘要CRISPR/Cas9是近年来发展起来的一种非常高效的基因组定点编辑技术。然而,很多研究表明设计的单一向导RNA(SingleguideRNA,sgRNA)通常会与基因组DNA发生一定概率的序列错配,从而引起非预期的基因组编辑,即所谓的脱靶效应(Off-targeteffects)。脱靶效应是制约CRISPR/Cas9基因编辑技术得以迅速发展的重要掣肘,CRISPR/Cas9脱靶检测则成为降低脱靶率的重要前提,引起了很多科学工作者的关注。本文将重点介绍现行的几种脱靶检测方法,并对其原理进行分析与对比研究。
简介:目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9?MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9?MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228bpMAD2L1PCR产物,可被酶切成166bp和62bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。
简介:摘要:基于物料守恒、能量守恒和反应动力学原理,建立了PS转炉铜锍吹炼造渣期冷量的计算公式。研究结果对优化冷料添加进而实现节能降耗具有指导意义。
简介:【摘要】量感是小学生必备的核心素养之一,是形成抽象能力和应用意识的经验基础和桥梁。量感是对可测量事物的大小、多少、长短等属性的直观感知,但这种直观感知是基于丰富体验活动中的经验积累。所以,量感的培养非一朝一夕之事,充分的感量体验活动是发展学生量感的基础与前提,教师应创设多元的感量体验活动,让学生在活动中经历观察、操作、猜想、实验、比较等过程亲身体验量的产生、叠加、形成的过程,逐步感悟量的本质特征,积累量的实践经验,培养量感,发展数学素养。