简介：摘要目的观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)是否促进角质形成细胞(KCs)中血管内皮细胞因子CD34的表达。方法2020年10月至2021年7月，15只C57BL/6小鼠背部制作全皮层缺损创面，给予及时护理，分别取正常组织及第1、3、5、7天创面组织进行蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF表达。细胞实验分为KCs组和KCs+VEGF组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CD34信使RNA(mRNA)水平，Western blot检测CD34、Delta样配体4(DLL4)、肝配蛋白B2 (Ephrin B2)蛋白水平的表达；加入VEGF组和VEGF+VEGF抑制剂L-685458组采用Western blot检测CD34蛋白表达。应用图像处理软件Image J和统计软件GraphPad Prism6分析，两组间比较采用t检验，多组间采用单因素方差分析。结果随着时间的推移，创面组织中VEGF蛋白表达水平呈动态升高(N＝0.344±0.037，d1＝0.158±0.019，d3＝0.298±0.006，d5＝0.509±0.066，d7＝1.056±0.172，F＝172.8，P<0.01)。加入VEGF后，角质形成细胞CD34 mRNA表达增加(KCs＝1.33±0.36，KCs+VEGF＝5.04±0.51，t＝10.25，P<0.01)，CD34、DLL4、Ephrin B2蛋白表达水平升高(KCs＝0.268±0.026，KCs+VEGF＝0.693±0.005，tCD34＝27.78，PCD34<0.01；KCs＝0.172±0.063，KCs+VEGF＝0.609±0.171，tDLL4＝4.785，PDLL4<0.05；KCs＝0.293±0.031，KCs+VEGF＝0.835±0.049，tEphrin B2＝16.26，PEphrin B2<0.05)，而加入VEGF抑制剂L-685458后，角质形成细胞中CD34表达低于VEGF组(VEGF＝0.777±0.053，VEGF+L-685458＝0.263±0.053，t＝11.83，P<0.01)。结论VEGF促进角质形成细胞中血管内皮细胞相关因子CD34、DLL4、Ephrin B2的表达。

简介：摘要角质形成细胞(KC)是构成表皮的主要细胞，具有免疫原性且发挥着重要的免疫作用。KC介导的免疫反应在固有免疫应答中发挥着始动作用。KC主要通过Toll样受体和核苷酸结合寡聚化结构域样受体识别抗原，活化后通过信号转导途径上调细胞因子、趋化因子和抗菌肽的表达，帮助启动皮肤免疫应答；通过吸引炎症细胞和固有免疫细胞，如肥大细胞、巨噬细胞等参与早期固有免疫应答。关于KC免疫原性的分子生物学机制与调控措施的研究对构建皮肤替代物，如细胞膜片用于创面修复有着重要的意义。本文对皮肤KC的免疫学特性与基因调控的研究进展进行综述。

简介：摘要目的探讨白藜芦醇对中波紫外线（UVB）照射后人原代角质形成细胞（HEK）凋亡和细胞周期的影响。方法0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇处理人原代角质形成细胞12 h，分别采用CCK-8、BrdU和LDH法检测白藜芦醇对细胞增殖活性和死亡的影响。分别采用50 mJ/cm2 UVB和100 μmol/L白藜芦醇处理HEK细胞，分为正常对照组、白藜芦醇组、UVB组和UVB+白藜芦醇组，采用Western印迹检测凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和胱天蛋白酶3（caspase-3）以及细胞周期相关蛋白（cyclin）B1和cyclin E1的表达水平，采用流式细胞仪检测细胞凋亡水平和细胞周期分布。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇组HEK细胞增殖活性差异有统计学意义（F=46.52，P < 0.001），不同浓度组均低于对照组（均P < 0.001）；100 μmol/L白藜芦醇组细胞DNA合成活力（0.761 ± 0.141）低于对照组（2.226 ± 0.141，t=17.92，P < 0.001）；25、50、100和200 μmol/L白藜芦醇组细胞死亡率差异无统计学意义（F=1.938，P > 0.05）。UVB和白藜芦醇处理后，4组细胞凋亡率和G1期、G2期、S期的细胞比例以及PARP、caspase-3、cyclin B1、cyclin E1的表达水平差异均有统计学意义（均P < 0.05）。UVB组细胞凋亡率（24.69% ± 3.54%）及PARP、caspase-3的剪切水平（2.190 ± 0.349、0.090 ± 0.016）均高于对照组和UVB+白藜芦醇组（4.00% ± 0.81%、0.926 ± 0.040、0.024 ± 0.019，均P < 0.05）；UVB组cyclin E1、cyclin B1蛋白水平（0.116 ± 0.017、0.775 ± 0.080）均低于正常对照组，UVB+白藜芦醇组cyclin E1表达水平（0.287 ± 0.047）高于UVB组、cyclin B1表达水平（0.504 ± 0.009）低于UVB组（均P < 0.05）；UVB组S期细胞比例低于对照组和UVB+白藜芦醇组，G1期、G2期细胞比例均高于UVB+白藜芦醇组（P < 0.05）。结论白藜芦醇可以抑制HEK增殖活力，抑制紫外线照射诱导的细胞凋亡，调控细胞周期进程。

简介：摘要目的探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)在体外培养中对毛囊角质形成细胞增殖的影响及其机制。方法体外实验培养毛囊角质形成细胞，按照干预措施不同分为6组，A组为单纯毛囊角质形成细胞组；B组为毛囊角质形成细胞+pADM组(20 mg/L)；C组为毛囊角质形成细胞+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(10 μg/L)；D组为毛囊角质形成细胞+TNF-α抑制剂组(Lenalidomide)；E组为毛囊角质形成细胞+TNF-α(10 μg/L)+pADM组(20 mg/L)；F组为毛囊角质形成细胞+TNF-α抑制剂+pADM组(20 mg/L)。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法分别测定各组的淋巴增强因子1(LEF-1) mRNA及细胞核增殖抗原(Ki-67) mRNA的表达。免疫荧光标记法检测B、E、F组的毛囊角质形成细胞，观察pADM对毛囊角质形成细胞增殖的影响。两组间比较采用独立样本t检验。结果A组(LEF-1，1.093±0.121，Ki-67，1.100±0.089)毛囊角质形成细胞中LEF-1 mRNA及Ki-67 mRNA的表达低于B组(LEF-1，2.973±0.234，Ki-67，2.577±0.067)和D组(LEF-1，1.867±0.045，Ki-67，1.967±0.136)，但高于C组(LEF-1，0.450±0.090，Ki-67，0.490±0.026)。A组与B组、A组与C组、A组与D组之间的差异均有统计学意义(A比B，tLEF-1＝14.280，P<0.05；tKi-67＝15.390，P<0.05；A比C，tLEF-1＝4.887，P<0.05；tKi-67＝ 6.356，P<0.05；A比D，tLEF-1＝5.875，P<0.05；tKi-67＝9.030，P<0.05)；B组(LEF-1，2.973±0.234，Ki-67，2.577±0.067)毛囊角质形成细胞中LEF-1 mRNA及Ki-67 mRNA的表达高于E组(LEF-1，1.793±0.078，Ki-67，1.940±0.165)，而低于F组(LEF-1，4.257±0.266，Ki-67，3.193±0.155)，B组与E组，B组与F组的差异均有统计学意义(B比E，tLEF-1＝8.964，P<0.05；tKi-67＝6.634，P<0.05；B比F，tLEF-1＝9.749，P<0.05；tKi-67＝-6.425，P<0.05)；免疫荧光结果显示，B组毛囊角质形成细胞数量高于E组而低于F组。结论在体外培养中，pADM可能通过下调TNF-α促进LEF-1和Ki-67的表达，从而促进毛囊角质形成细胞的增殖。

简介：摘要目的探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)对大鼠角质形成细胞细胞周期蛋白(Cyclin) D1的影响及其机制。方法体外培养原代大鼠角质形成细胞，免疫组织化学鉴定原代角质形成细胞；实验分组：对照组、pADM组、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路激动剂SKL2001组、pADM+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535组；采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析大鼠角质形成细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子以及细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。两组间比较采用非配对t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果pADM组Wnt/β-catenin信号通路相关分子Wnt3a，β-catenin，LEF-1和细胞周期蛋白Cyclin D1表达水平高于对照组(Wnt3a，qPCR：2.489±0.414比1.210±0.242，t＝4.068，P<0.05；Western blot：0.571±0.043比0.217±0.071，t＝7.401，P<0.05；β-catenin，qPCR：2.594±0.244比0.818±0.188，t＝9.877，P<0.05；Western blot：0.794±0.031比0.420±0.026，t＝16.12，P<0.05；LEF-1，qPCR：2.816±0.190比0.896±0.090，t＝9.702，P<0.05；Western blot：0.700±0.124比0.276±0.090，t＝4.781，P<0.05；Cyclin D1，qPCR：2.708±0.305比0.922±0.095，t＝15.720，P<0.05；Western blot：0.554±0.097比0.166±0.067，t＝5.723，P<0.05)；pADM+FH535组Wnt3a，β-catenin，LEF-1和Cyclin D1表达水平低于pADM组(Wnt3a，qPCR：0.350±0.049比0.964±0.159，F＝49.890，P<0.05；Western blot：0.192±0.106比0.485±0.028，F＝47.780，P<0.05；β-catenin，qPCR：0.431±0.149比0.919±0.074，F＝39.430，P<0.05；Western blot：0.174±0.013比0.386±0.048，F＝49.950，P<0.05；LEF-1，qPCR：0.502±0.067比0.954±0.112，F＝79.130，P<0.05；Western blot：0.091±0.037比0.377±0.055，F＝121.000，P<0.05；Cyclin D1，qPCR：0.264±0.049比0.962±0.037，F＝105.500，P<0.05；Western blot：0.111±0.053比0.297±0.023，F＝137.300，P<0.05)。结论pADM有类似于Wnt/β-catenin信号通路激动剂的作用，其可通过激活Wnt/β-catenin信号通路提高大鼠角质形成细胞中Cyclin D1的表达，FH535可阻断pADM对Cyclin D1的激活作用。

简介：摘要目的探讨血清细胞角质蛋白片段18 （CCCK-18）在缺血性脑卒中（CIS）患者的变化及诊断价值。方法选取2018年10月至2019年10月湖北医药学院附属东风医院诊治的106例CIS患者作为研究组，同期行数字减影全脑血管造影（DSA）检查显示颅内外无显著异常的其他颅脑疾病患者90例作为对照组，两组基线资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。采集两组研究对象肘静脉血5 ml，采用酶联免疫吸附法检测血清CCCK-18水平；酶法检测总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。利用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清CCCK-18对CIS患者的诊断效能，Pearson检验分析血清CCCK-18水平与TC、TG、LDL-C、HDL-C的相关性。结果研究组血清CCCK-18、TC、TG、LDL-C水平明显高于对照组[（158.10 ± 50.89） U/L比（85.57 ± 35.25） U/L、（4.26 ± 0.92） mmol/L比（3.92 ± 0.80） mmol/L、　（2.34 ± 0.53） mmol/L比（1.83 ± 0.47） mmol/L、（3.12 ± 0.73） mmol/L比（2.61 ± 0.67） mmol/L]，　HDL-C低于对照组[（1.20 ± 0.24） mmol/L比（1.32 ± 0.28） mmol/L]，差异有统计学意义（P<0.05）。Logistic回归分析结果显示，CCCK-18、TC、TG、LDL-C、HDL-C是CIS患者独立危险因素（P<0.05）。血清CCCK-18鉴别CIS患者与对照组的曲线下面积（AUC）为0.878，灵敏度和特异度分别为84.91%、78.89%；鉴别轻度CIS患者AUC为0.763，灵敏度和特异度分别为70.37%、78.89%。相关性分析显示，CIS患者血清CCCK-18与TC、TG、LDL-C呈正相关（r = 0.711、0.722、0.705），与HDL-C呈负相关（r = - 0.714），差异均有统计学意义（P<0.01）。结论CIS患者血清CCCK-18水平明显增高，可作为患者诊断和评估病情严重程度的生物学标志物。

简介：摘要目的探讨血清细胞角质蛋白片段18 （CCCK-18）在缺血性脑卒中（CIS）患者的变化及诊断价值。方法选取2018年10月至2019年10月湖北医药学院附属东风医院诊治的106例CIS患者作为研究组，同期行数字减影全脑血管造影（DSA）检查显示颅内外无显著异常的其他颅脑疾病患者90例作为对照组，两组基线资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。采集两组研究对象肘静脉血5 ml，采用酶联免疫吸附法检测血清CCCK-18水平；酶法检测总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。利用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清CCCK-18对CIS患者的诊断效能，Pearson检验分析血清CCCK-18水平与TC、TG、LDL-C、HDL-C的相关性。结果研究组血清CCCK-18、TC、TG、LDL-C水平明显高于对照组[（158.10 ± 50.89） U/L比（85.57 ± 35.25） U/L、（4.26 ± 0.92） mmol/L比（3.92 ± 0.80） mmol/L、　（2.34 ± 0.53） mmol/L比（1.83 ± 0.47） mmol/L、（3.12 ± 0.73） mmol/L比（2.61 ± 0.67） mmol/L]，　HDL-C低于对照组[（1.20 ± 0.24） mmol/L比（1.32 ± 0.28） mmol/L]，差异有统计学意义（P<0.05）。Logistic回归分析结果显示，CCCK-18、TC、TG、LDL-C、HDL-C是CIS患者独立危险因素（P<0.05）。血清CCCK-18鉴别CIS患者与对照组的曲线下面积（AUC）为0.878，灵敏度和特异度分别为84.91%、78.89%；鉴别轻度CIS患者AUC为0.763，灵敏度和特异度分别为70.37%、78.89%。相关性分析显示，CIS患者血清CCCK-18与TC、TG、LDL-C呈正相关（r = 0.711、0.722、0.705），与HDL-C呈负相关（r = - 0.714），差异均有统计学意义（P<0.01）。结论CIS患者血清CCCK-18水平明显增高，可作为患者诊断和评估病情严重程度的生物学标志物。

简介：摘要血栓形成是指血液在血管中发生凝固或血液中某些有形成分凝集形成固体质块的过程。细胞外囊泡(extracellular vesicle，EV)是一种成熟的细胞间通讯介质，可由不同细胞在活化或凋亡状态下释放。研究表明，EV在血栓形成过程中发挥重要作用。EV表面及胞体内有多种促凝物质表达，且EV与内皮细胞功能障碍、凝血因子VII(coagulation factor，FVII)异常激活以及血小板聚集与活化有关，此外，EV还可参与抗凝或纤溶途径。监测外周血EV水平，可为多种血栓性疾病的预防、治疗及预后提供新思路。

简介：摘要目的寻找内毒素耐受（ET）的潜在关键基因，为脓毒症的治疗提供理论和实验依据。方法①实验1（基因芯片与生物信息分析）：从基因表达数据库（GEO）中下载ET相关基因数据集GSE47783，该数据集由脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞建立脓毒症模型（LPS组）和ET模型（ET组）后进行实验获得；利用IDEP 0.92软件筛选数据集中两组差异表达基因（DEG），同时进行基因本体（GO）分析，并定位DEG主要富集的功能和信号通路。利用基因与蛋白质相互作用检索数据库（STRING），针对DEG构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，筛选出核心基因甲型肝炎病毒细胞膜蛋白受体2（HAVCR2）进行后续验证研究。②实验2（小鼠巨噬细胞株RAW264.7模型制备）：体外培养RAW264.7细胞，通过LPS刺激制备ET模型（ET组，用10 μg/L的LPS培养24 h后，再用100 μg/L的LPS培养4 h）和脓毒症模型（LPS组，用100 μg/L的LPS培养4 h）；磷酸盐缓冲液（PBS）组给予等体积溶媒PBS培养4 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞HAVCR2的mRNA及蛋白表达。③实验3（HAVCR2慢病毒载体转染RAW264.7细胞）：为进一步明确HAVCR2是否参与ET形成，用慢病毒短发夹RNA（shRNA）技术敲低RAW264.7细胞中的HAVCR2后，再制备ET模型（HAVCR2--ET组），并设非敲低HAVCR2的对照组（ET组）。采用RT-qPCR法检测细胞中巨噬细胞极化关键基因〔精氨酸酶1（ARG1）、CD206、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、一氧化氮合酶2（NOS2）〕的mRNA表达。结果①实验1：共获得1 013个DEG；与LPS组比较，ET组有521个上调基因，492个下调基因；这些DEG的功能主要为增加生物合成、抑制炎症反应，主要富集于Janus激酶/信号转导与转录激活因子（JAK/STAT）、NOD样受体、Toll样受体（TLR）、TNF、缺氧诱导因子-1（HIF-1）等信号通路。选择ET组第一个表达上调的膜蛋白HAVCR2作为验证研究的目标。②实验2：体外实验结果显示，经大剂量LPS处理后，RAW264.7细胞中HAVCR2 mRNA表达较PBS组明显下调；而ET组HAVCR2 mRNA表达明显高于LPS组（2-ΔΔCT：1.10±0.10比0.60±0.10，P<0.05）；Western blotting检测结果与RT-qPCR结果一致。③实验3：与ET组相比，HAVCR2--ET组细胞ARG1和CD206的mRMA表达明显降低〔ARG1 mRNA（2-ΔΔCT）：0.50±0.10比1.00±0.10，CD206 mRNA（2-ΔΔCT）：0.73±0.10比1.00±0.10〕，下游因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达明显升高〔TNF-α mRNA（2-ΔΔCT）：2.20±0.10比1.00±0.10，IL-1β mRNA（2-ΔΔCT）：9.00±0.10比1.00±0.10〕，差异均有统计学意义（均P<0.05）；两组NOS2 mRNA表达差异无统计学意义。结论HAVCR2参与脓毒症下游炎性因子的调节，参与ET的形成，有望成为脓毒症新的治疗靶点。

简介：摘要瘢痕形成，又称为组织纤维化，是身体大多数器官病理损伤后一种常见反应。涉及细胞群体：骨髓来源的循环纤维细胞、内皮细胞、常驻成纤维细胞、上皮细胞以及血管周围细胞(周细胞)。其中周细胞是一种血管壁细胞，位于微血管系统的内皮细胞基底膜侧，在血管生成、维持血脑屏障、调节毛细血管功能、介导免疫细胞进入大脑和组织修复、纤维化反应等方面发挥重要作用。越来越多的研究表明周细胞参与了中枢神经系统的瘢痕形成。该文综述了脊髓损伤、癫痫、创伤性脑损伤等中枢神经系统疾病的瘢痕形成过程，重点强调周细胞在中枢神经系统瘢痕形成中的作用，在此基础上对周细胞参与瘢痕形成调节的研究前景进行展望。

简介：摘要硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)在抑制中性粒细胞胞外捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)的形成中发挥重要的生理作用。H2S通过多种途径抑制NETs的形成，包括抑制血小板活化介导的NETs产生，上调miR-16-5P抑制其目标基因磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 1, PIK3R1)和RAF1的表达，抑制丝裂原活化蛋白激酶家族(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)途径，减少活性氧(reactive oxygen species, ROS)及呼吸爆发，降低自噬和细胞内钙离子水平等。文章就硫化氢类药物及其衍生制品的研发和应用、NETs相关疾病的临床防治进行了综述。

简介：摘要：由于核基因突变导致PFKFB4代谢激酶异常活跃导致SRC3核受体共激活因子磷酸化。影响线粒体基因突变引发沃伯格效应，产生癌细胞。癌细胞快速的增殖速度以及糖酵解异常产生乳酸盐导致人体内环境稳态失衡从而致死。癌细胞高耗糖，低产能，产生大量有害物质。线粒体药物有机会成为门槛更低且更有效的药物。

简介：

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