简介：应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母，用以检测类，抗雌激素化合物和环境样品的类，抗雌激素活性．采用多聚酶链反应（PCR）法扩增人雌激素受体（hER）基因，构建诱饵质粒pGBKT7-ERLBD；分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGADg24-GRIP1和pGAD424-SRC1；诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187，于营养缺陷型培养基（SD／-Trp／-Leu）上筛选阳性菌落，分别构建两种ER双杂交酵母ER＋GRIP1和ER＋SRC1．考察双杂交酵母与不同激素：17β-雌二醇（E2）、二氢睾酮（DHT）、孕酮（PG）以及三碘甲状腺原氨酸（T3）的结合情况，并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬（4-OHT）与酵母的相互作用．结果表明：ER＋GRIP1和ER＋SRC1酵母均能够专一性的和E2结合，并存在显著的剂量-效应关系，E2对ER＋GRIP1和ER＋SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7．3×10^-11mol·L^-1和1．5×10^-10mol·L^-1，其中ER＋GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER＋SRC1-酵母细胞．4-OHT能够抑制E2诱导ER＋GRIP1酵母细胞产生的酶活性，并存在显著的剂量-效应关系，IC50值为1．0×10^-7mol·L^-1．表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类，抗雌激素活性．

简介：为什么要参入TEL中国?TEL公司的文化和价值观是什么?如何成为一个有人生追求、有理想的人?钮永军TEL中国半导体设备资深维修工程师自2001年加入TEL中国,钮永军这个毕业于合肥工业大学的小伙子,在半导体设备维修部门一干就是10

简介：阐述了酵母表达系统在表达外源基因特别是大分子真核生物基因方面的优越性,分析了由于酵母表达系统的局限性如聚合体的存在、信号肽加工不完全、内部降解等而造成的产物不均一现象,提出了相应的解决方法。

简介：无

简介：巴斯德毕赤酵母表达载体连同外源基因通过同源重组整合至宿主染色体基因组座位上,我们将在巴斯德毕赤酵母中表达外源蛋白的情况总结如表1,　　巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白分胞内的表达和分泌到胞外两种方式

简介：本文研究了发酵过程中高级醇的产生与基本氨基酸代谢的关系.在发酵液中加入一定量的缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸,结果酵母对这三种氨基酸的同化作用增强,相应高级醇的产量也增加了,表明啤酒的高级醇含量与相应氨基酸的同化作用有关.于是,我们尝试从啤酒酵母基本氨基酸透性酶的BAP2基因表达着手,研究了它在发酵过程中对基本氨基酸同化的影响和对高级醇产生的影响.BAP2基因的表达能促进缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的同化率,从而导致啤酒中异戊醇(由亮氨酸合成)含量增加,但由缬氨酸合成的异丁醇和由异亮氨酸合成的戊醇并没有增加.而且结果还显示每种高级醇的合成机理是相互联系的.

简介：利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称OCIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.

简介：无

简介：MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母单杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建木薯酵母单杂交cDNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为7.08×106,插入片段大小在250~2000bp间。筛选大于1000bp的35个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析筛选出锌指蛋白、组氨酸蛋白H1.2和AT-hook核定位蛋白三个转录因子以及一个线粒体受体TOM5。为进一步研究MeCWINV6基因的表达调控机制提供了候选转录因子。

简介：本实验通过构建酿酒酵母ADH2基因沉默表达载体，电转化法转化酿酒酵母工程菌Y01，获得酿酒酵母ADH2基因沉默突变株S01。发酵实验结果表明沉默突变株乙醇产量相对较低。说明沉默突变株体内乙醇合成途径受到干扰。

简介：摘要：目的：通过此次的研究来，对儿童淋巴细胞白血病的早期诊断中，探究对融入外周血幼稚淋巴细胞、染色体、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL融合基因联合检测方法的作用和临床价值。方法：此次的研究选取的是来我院进行治疗，并且被诊断为异常淋巴细胞病例的幼儿患者220例，对这些幼儿患者进行外周血幼稚淋巴细胞形态学的检查，并且对这些病例中患有急性淋巴细胞白血病的幼儿患者进行静脉血的抽取与血液检查。结果：根据检查结果显示，其中有24例幼儿患者是具有特殊性的白血病型幼稚淋巴细胞，这24例幼儿患者中的外周血细胞中比例范围也是不同的，其中有3例幼儿患者外周血细胞比例范围在1%～10%，有11例幼儿患者外周血细胞比例范围在11%～20%，有10例幼儿患者外周血细胞比例范围在21%～38%。对其中外周血细胞比例范围在10%～38%的21例幼儿患者进行染色体的检测以及E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL融合检测，从检测结果分析中能够得出，其中检测出异常的有2例，TEL/AML1为阳性的一共有5例，E2A/PBX1为阳性的有2例，最后MLL为阳性的有1例。结论：在对儿童淋巴细胞白血病的早期诊断过程中，使用外周血幼稚淋巴细胞、染色体、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL融合基因联合检测方法能够有效地发挥出巨大的诊断，价值相比较于传统的检查模式当中更具有推广意义，有着巨大的临床价值。

简介：酵母基地的人才“酵母”李一丹１９９４年１０月２３日，中央电视台《新闻联播》节目报道，我国最大的食用酵母基地在宜昌建成。这个基地就是国家“七五”工业性试验项目，集科研，生产，贸易为一体，年产４０００吨高活性干酵母的宜昌食用酵母基地。这个日前我国乃至业洲...

简介：采用pGAPZαA为表达载体，SMD1168毕赤酵母为受体系统，构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因，共设计4对引物，采用SOE—PCR法合成Brazzein基因，构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化，电转导人Pichia．pastorisSMD1168中，用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达，进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌，SDS—PAGE表明，目标蛋白的相对分子量与理论值一致，诱导72h后的目的蛋白表达量达0．12dE。

简介：目的：构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法：利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin（100μg/mL）抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3＇-AOX/5＇-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果：以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论：成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。

简介：时隔一年,笔者又来到TEL中国,来到陈捷先生的办公室。同样的人、同样的场景,不同的是一年之前,TEL和整个半导体产业都深陷在金融危机的大泥潭中,而一年之后的今天,TEL已经率先进

简介：无

简介：目的构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白（rhINGAP）载体毕赤酵母。方法通过PCR扩增INGAP基因，插入到重组质粒α,／pUC18的α因子信号序列处，再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K，SalI酶切线性化重组质粒αINGAP／pPIC9K。电穿孔转化毕赤酵母，营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子，PCR鉴定是否含有目的基因INGAP，甲醇诱导rhINGAP的表达，Westernblotting鉴定目的蛋白，ELISA法定量测定其含量。结果重组表达质粒αINGAP／pPIC9K经酶切获得758bp片段，符合α因子与INGAP片段融合的长度，筛选得到3个阳性转化子，培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白。结论成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株。

简介：目的构建含Sonichedgehog（SHH）蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体。方法通过BamH1、Xho1双酶切、T4连接酶连接，将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体，构建pET22b-SHH-N质粒；经PCR扩增，产物再与pTA2载体连接，构建pTA2-SHH-N重组质粒；经EcoR1及Not1双酶切、T4连接酶连接，将SHH—N端基因片段插入pPIC9K质粒，构建pPIC9K-SHH-N重组质粒；通过线性化、脱磷酸化，将线性化pPIC9K-SHH-NDNA转染毕赤酵母菌株GS115，最后经PCR扩增和测序鉴定。结果转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段，与原始的基因片段序列完全一致。结论成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体。

简介：酵母性能鉴定是全面了解酵母菌种生理特性与发酵性能的实验手段。在生产过程中，对比这些性能指标，有助于正确了解和分析当前所使用酵母菌种的性能，对指导生产有重要的意义。本文对所使用的WX-1菌种进行了性能鉴定和筛选的实验研究，通过实验结果的分析对比，对WX-1菌种作一个基本评估，给工艺调整和生产控制提供有价值的参考。

简介：摘要OBSL1基因编码细胞骨架适配蛋白，其在连接细胞膜结合胞核蛋白中发挥细胞质支持网络作用，与3M综合征等疾病密切相关，目前的研究多与此有关，而在其他疾病的研究中少见。本文旨在对OBSL1基因的结构、功能、与3M综合征及肿瘤相关的研究现状进行综述。