简介:摘要目的观察缓激肽后处理对心肺复苏(CPR)大鼠的神经保护作用,并探讨其可能机制。方法将48只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、心搏骤停组(CA组)、缓激肽后处理组(BK组)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C+缓激肽后处理组(CP+BK组),每组最终取8只大鼠进行后续实验。采用窒息法诱导大鼠心搏骤停模型;Sham组仅给予动静脉置管、气管插管及机械通气等有创操作,未用窒息法诱导心搏骤停。心搏骤停前30 min,CP+BK组大鼠腹腔注射Compound C(250 μg/kg),其余各组大鼠经腹腔注射相同剂量的二甲亚砜(DMSO),自主循环恢复(ROSC)后48 h BK组和CP+BK组经腹腔注射缓激肽150 μg/kg,其余各组经腹腔注射相同剂量的生理盐水。ROSC后72 h用神经功能缺损评分(NDS)量表评价各组大鼠神经功能;采用免疫组化法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62的表达;透射电镜下观察各组自噬小体形成情况;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测各组海马CA1区神经元凋亡情况。结果与Sham组比较,CA组NDS评分明显降低(分:60.75±5.80比80.00±0.00,P<0.01),LC3、p62蛋白表达量明显增多〔LC3(A值):1.04±0.64比0.40±0.14,p62(A值):2.75±0.57比0.36±0.12,均P<0.05〕,自噬小体明显增多,细胞凋亡率明显升高〔(39.00±8.00)%比(3.87±1.90)%,P<0.05〕。与CA组比较,BK组NDS升高(分:67.75±6.32比60.75±5.80,P<0.05),LC3蛋白表达量明显升高(A值:1.60±0.34比1.04±0.64,P<0.05),自噬小体数量增多,p62蛋白表达量及细胞凋亡率明显降低〔p62(A值):1.51±0.32比2.75±0.57,细胞凋亡率:(23.03±1.91)%比(39.00±8.00)%,均P<0.05〕。与BK组比较,CP+BK组NDS降低(分:59.00± 8.19比67.75±6.32,P<0.05),自噬小体数量减少,自噬相关蛋白LC3表达量明显降低(A值:0.62±0.41比1.60± 0.34,P<0.05),p62表达量和细胞凋亡率均明显升高〔p62(A值):3.50±0.47比1.51±0.32,细胞凋亡率:(44.53±10.15)%比(23.03±1.91)%,均P<0.05〕。结论缓激肽后处理可以通过激活自噬、减少神经元凋亡,从而发挥神经保护作用。
简介:摘要肾纤维化是各种病因导致的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)进展至终末期肾病的共同病理变化,其治疗研究一直受到广泛关注,改善肾纤维化所致的肾功能障碍被认为是治疗CKD的重要策略。自噬作为一种进化上高度保守的细胞内降解系统,已被证实与肾纤维化的发生发展密切相关。其中,肾脏固有细胞自噬变化对肾纤维化的影响被研究得较多;然而,自噬对肾纤维化的作用可能是细胞特异性及疾病环境依赖性的,即在不同的细胞或不同的疾病模型可能有截然相反的作用。因此,自噬对肾纤维化的作用仍然存在一定的争议。本文就肾脏固有细胞自噬在不同疾病条件下对肾纤维化作用的研究进展进行综述。
简介:摘要钙稳态失衡和自噬异常是PD、AD及肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的重要发病机制,二者之间存在相关性。研究显示,细胞不同储钙区室可经钙通道或钙离子(Ca2+)相关信号蛋白影响自噬,例如细胞膜钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)和瞬时受体电位通道(TRPC)、内质网钙通道肌醇1,4,5-三磷酸受体(IP3R)途径、线粒体Ca2+摄取相关的钙单向转运体(MCU)、溶酶体钙通道瞬时受体电位通道粘蛋白1(TRPML1)和两孔通道、胞浆钙调素依赖蛋白激酶的激酶β(CaMKKβ)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)途径等。本文现围绕神经退行性疾病中细胞内不同储钙区室和胞浆Ca2+调控自噬的研究进展进行综述,以期加深临床同道对其的认识。
简介:摘要目的探讨自噬对Sprague-Dawley(SD)大鼠梗阻性黄疸肝损伤的影响及其机制。方法健康雄性SD大鼠35只,SPF级,6~8周龄,200~300 g,分为5组:假手术组(单纯游离胆总管,不结扎,腹腔内注射生理盐水)、胆总管结扎(OJ)组(游离胆总管,并双重丝线结扎,腹腔内注射生理盐水)、OJ+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、OJ+雷帕霉素(Rapamycin)组和OJ+3-MA+VX-765组,每组7只。HE染色观察肝脏组织学变化。免疫组化染色检测自噬相关蛋白Atg5表达水平。全自动生化仪检测肝功能。酶联免疫吸附试剂盒检测血清白细胞介素(IL)-18水平。蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白水平及内质网应激相关凋亡通路。结果通过免疫组化染色,OJ组自噬相关蛋白Atg5相对表达量较假手术组增加[(5.0±1.0)比(2.8±1.3)],差异有统计学意义(t=-3.00,P<0.05)。与假手术组比较,OJ组自噬活性增加,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1/p-65及炎症因子IL-18水平升高,同时内质网发生应激并诱导其相关性凋亡。应用自噬抑制剂3-MA后,与OJ组比较,OJ+3-MA组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平增加,同时肝损伤加重;而应用自噬激动剂Rapamycin后,与OJ组比较,OJ+Rapamycin组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平下降,同时肝损伤减轻。应用Caspase-1特异性阻断剂VX-765后,与OJ+3-MA组比较,OJ+3-MA+VX-765组中Caspase-1/p-65蛋白水平及炎症因子IL-18水平下降,同时肝损伤减轻。结论胆总管结扎后,诱导内质网应激相关性凋亡及激活自噬。活化的自噬减轻SD大鼠梗阻性黄疸肝损伤,可能与抑制Caspase-1/p-65炎症通路相关。
简介:摘要目的探讨尼古丁在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤炎症反应中的作用及机制。方法本研究为实验研究。动物实验部分,应用LPS构建急性肺损伤小鼠模型,将C57BL/6J小鼠24只,按体质量排序,采用蛇形分组法分为4组,每组6只,对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组。留取肺组织行HE染色,肺泡灌洗液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)水平。细胞实验部分,采用MH-S细胞系,分为4组,对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组,取细胞上清液行ELISA检测IL-1β水平,采用细胞裂解液提取总蛋白行蛋白免疫印迹法检测NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1、LC3BⅡ、LC3BⅠ、P62蛋白水平,免疫荧光检测LC3B表达,透射电镜观测自噬小体数量。结果LPS组较对照组,肺组织出现明显炎性细胞浸润。支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高;LPS+尼古丁组较LPS组,肺组织炎性细胞浸润减轻,支气管肺泡灌洗液和细胞上清液中IL-1β水平降低;LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组,肺组织炎性细胞浸润加重,支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高,差异均有统计学意义(F值分别为446.40、656.40,P值均<0.001)。蛋白免疫印迹法检测各组MH-S细胞裂解液,LPS组较对照组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高,LPS+尼古丁组较LPS组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase 1表达水平下降,LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高,差异均有统计学意义(F值分别为180.00、301.70、105.80,P值均<0.001)。使用透射电镜观察4组MH-S细胞自噬小体,采用蛋白免疫印迹法检测4组MH-S细胞中P62及LC3BⅡ/LC3BⅠ表达显示,与对照组比较,LPS组自噬小体数量增多,P62表达水平降低,LC3BⅡ/LC3BⅠ升高;LPS+尼古丁组较LPS组自噬小体数量增多,P62表达水平降低,LC3B Ⅱ/LC3BⅠ升高,LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组自噬小体数量减少,P62表达水平升高,LC3B Ⅱ/LC3BⅠ降低,差异均有统计学意义(F值分别为45.25、152.00、137.40,P值均<0.05)。结论尼古丁通过增强自噬减弱LPS诱导的急性肺损伤炎症反应及NLRP3炎症小体的活性。
简介:摘要目的探讨骨保护素(OPG)/细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)/细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路介导的自噬及微小RNA(miRNA,miR)-217的靶向调控在骨巨细胞瘤(GCT)中作用。方法在建立肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的基础上,分为空白对照组,神经钙黏蛋白(N-cadherin)组(miR-217类似物组),转染miR-217组。评估各组骨巨细胞瘤的活性、增殖及迁移水平;检测miR-217、OPG、RANK、RANKL、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)在骨巨细胞瘤细胞中的mRNA和蛋白表达变化;多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA),组间比较采用多重极差最小显著性差异(LSD)。结果(1)miR-217在肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的调控都显著抑制GCT细胞的增殖和肿瘤细胞的发生[对照组吸光度(A)值为0.620±0.019,inhibitor NC组为0.640±0.019,miR-217 inhibitor组为0.950±0.030,inhibitorNC组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),而miR-217 inhibitor组与inhibitor NC组比较,差异有统计学意义(F=128.600,P<0.01)]。(2)miR-217抑制GCT细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,并抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子及自噬相关蛋白表达(OCN 1.41±0.06,OPG 1.41±0.04,RANKL 0.54±0.01,ATG 50.65±0.12,ATG 70.67±0.03,Beclin-1 0.56±0.10,LC3 0.83±0.04,F=265.100,P<0.01)。结论miR-217可能通过抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子表达来抑制GCT自噬,从而抑制GCT的发生。
简介:【摘要】慢性阻塞性肺疾病(COPD)是发病率,死亡率较高的呼吸系统疾病,其典型特征为持续性的气流交换受阻。这种特征是进展性,难逆转的,它与烟草的使用以及相关的炎症反应有关。自噬是由细胞自噬体,溶酶体所介导的降解细胞内某些内容物的过程,在生理状态下参与细胞代谢与某些细胞器的更新过程。在COPD的病理过程中,肺部细胞的自噬现象发生改变,这可能与疾病本身的发展有关。本文从自噬现象的变化特征、影响因素,相关机制展开论述,旨在为相关临床与科研工作提供新的思路。
简介:摘要目的探索吸烟肺腺癌组织中和自噬相关联的基因,并确定吸烟导致肺腺癌的潜在的自噬相关因素和预后因素。方法从GEO数据库下载2个数据集(GSE32863和GSE75037)的基因表达谱,同时下载来自TCGA数据库的吸烟肺腺癌患者的数据集。采用R中的微阵列数据包的线性模型探索来自吸烟的肺腺癌患者的样本与癌旁肺组织之间的差异基因。采用数据库DAVID进行差异基因的富集分析。采用相互作用基因/蛋白质检索的搜索工具和Cytoscape软件获得蛋白质-蛋白质相互作用网络并识别关键基因。此外,构建自噬相关基因和差异基因之间的网络。采用Kaplan-Meier分析总生存率。结果在GSE32863数据集确定了71个差异基因,在GSE75037数据集确定了641个差异基因,在TCGA数据集中确定了4 070个差异基因。3个数据集的交集显示了52个差异基因,并选择这些数据进行进一步研究。采用GO基因功能注释将52个差异基因分为生物学过程、分子功能和细胞组分3个类别,进行京都基因和基因组百科全书分析。总共有17个差异基因和自噬相关基因密切关联,其中LYVE1、RGCC、FOSB、ETV4、CDC20与自噬基因关联最为密切。LYVE1、CDC20的表达量在吸烟肺腺癌人群和不吸烟肺腺癌中比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且与肺腺癌患者总生存率相关(P值均<0.05),RGCC、FOSB、ETV4表达量在吸烟肺腺癌人群和不吸烟肺腺癌中比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论确定了LYVE1,CDC20为吸烟肺腺癌患者特异性的自噬相关基因。这些基因与患者的预后密切相关,可能为肺腺癌的治疗提供新的靶点。
简介:摘要目的探讨Bisperoxovanadium[bpV(pic)]对脊髓损伤(SCI)后自噬的影响及其机制。方法将20只SD大鼠购自右江民族医学院动物中心按随机数字表法分为假手术组、SCI组、bpV(pic)组;假手术组4只,另外两组每组8只。假手术组只行椎板切除术,不造成SCI;SCI组按Allen’s法制做SCI模型,不进行其他干预处理;bpV(pic)组在SCI模型基础上予bpV(pic)干预处理。伤后6 h、1、3、7、14 d对各组大鼠进行运动功能Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分。伤后2周对SCI组和bpV(pic)组SCI部位进行切片后苏木精-伊红(HE)染色和尼氏染色分析病理变化;免疫荧光分析SCI组和bpV(pic)组的LC3B蛋白变化,免疫印迹分析LC3B、Beclin1和磷酸化第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的蛋白变化。2周后通过免疫组织化学进一步验证SCI组与bpv(pic)组磷酸化PTEN的变化。采用两独立样本的t检验。结果假手术组的大鼠并没有出现运动功能的障碍,BBB评分一直稳定在21分左右。在SCI手术对照组,大鼠出现严重的运动功能失调,第7天,SCI手术对照组BBB评分为(6.02±1.02)分,bpv(pic)治疗组为[(7.82±0.11)分,t=3.039,P<0.05],第14天SCI手术对照组评分为(8.87±1.29)分,bpv(pic)治疗组为[(12.02±1.12)分,t=4.211,P<0.05],尼氏染色结果显示SCI手术组阳性率(12.45±1.90)%,bpv(pic)治疗组为(24.14±2.09)%,t=7.154,P<0.05],差异均有统计学意义。LC3B免疫荧光结果显示,SCI手术组阳性率为(7.71±2.08)%,bpv(pic)治疗组为(21.14±1.97)%( t=9.352,P<0.05),免疫印迹染色,LC3B SCI手术组相对表达量为0.32±0.12,bpv(pic)治疗组为2.67±0.21(t=17.110,P<0.05);Beclin1,SCI手术组相对表达量为0.86±0.22,bpv(pic)治疗组为1.91±0.31(t=4.784,P<0.05),差异均有统计学意义。免疫印迹法结果显示,SCI手术组p-pten相对表达量为0.31±0.05,bpv(pic)治疗组为0.19±0.04(t=3.246,P<0.05);SCI手术组p-ERK1/2相对表达量为0.03±0.01,bpv(pic)治疗组为0.95±0.20(t=7.785,P<0.05);免疫荧光,p-ERK1/2 SCI手术组阳性率(19.91±1.18)%,bpv(pic)治疗组为(52.43±3.97)%(t=17.620,P<0.05),差异均有统计学意义。结论bpV(pic)能明显改善大鼠SCI后的神经修复及运动功能恢复,其可能机制是bpV(pic)通过抑制PTEN的磷酸化活性,进而激活ERK1/2信号,增强神经细胞的自噬,进而促进损伤修复。
简介:摘要自噬是真核细胞中广泛存在的一种分解代谢途径,在固有免疫和适应性免疫中发挥着重要作用,特别是在HBV感染中,自噬扮演着不可或缺的角色。因此,探究自噬与HBV感染之间的关系,寻求新的作用靶点和药物,可以促进HBV相关疾病的治疗。本文就自噬在HBV感染中的作用及研究现状作一综述。
简介:摘要自噬是细胞在生理或病理因子作用下,通过溶酶体途径对功能受损的蛋白质和细胞器进行识别降解的一种现象。近年来研究发现自噬在感音神经性聋中起着重要作用,可通过参与毛细胞的氧化应激、能量代谢或与凋亡相互作用等途径影响感音神经性聋的发生发展。本文就不同损伤因素如遗传基因缺陷、耳毒性药物、衰老和噪声暴露等所致感音神经性聋的自噬机制进行探讨,旨在为感音神经性聋的预防及治疗提供新的思路。
简介:目的研究RNA干扰下调核因子E2相关因子2(Nrf2)对U251细胞自噬的影响.方法建立RNA干扰下调Nrf2表达的U251细胞系并在瞬时转染48h后,电镜观察细胞自噬相关结构的形态,Westernblot法、吖啶橙染色流式细胞术定量分析自噬水平的改变.结果与对照组相比,Si-Nrf2组Nrf2的蛋白水平明显下降(P<0.001),自噬泡结构增多,微管相关蛋白1轻链蛋白3BII型(LC3B-Ⅱ)的蛋白水平明显升高(P<0.001),酸性囊泡数量明显增多(P<0.05).结论RNA干扰下调Nrf2可以显著增强U251细胞的自噬水平.
简介:摘要目的探讨铁超载对大鼠认知功能的影响及其可能的内在机制。方法将30只8周龄雄性SPF级Srague Dawley(SD)大鼠随机分为两组,铁超载组(IO组)及空白对照组(Sham组),每组n=15。IO组大鼠采用右旋糖酐铁腹腔注射100 mg/(kg·d)持续28 d。利用Morris水迷宫方法检测两组大鼠的认知功能;Western blot法检测两组大鼠海马内的转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TfR1)、自噬相关蛋白p-AMP-蛋白激酶(p-AMP-activated protein kinase,p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、B细胞淋巴瘤-2相互作用蛋白1(Bcl-2 interacting protein 1,Beclin1)的变化;免疫荧光观察大鼠海马内LC3、Beclin1的表达;HE染色观察各组大鼠海马内的神经元形态变化。透射电镜法观察大鼠海马区神经元内自噬小体数量及内质网形态的改变。所得数据应用SPSS 20.0统计软件进行重复测量方差分析和t检验。结果Morris水迷宫定位航行实验结果显示,两组大鼠逃避潜伏期的组别和训练时间交互作用显著(F=3.55,P<0.01)。简单效应分析显示,与Sham组[(28.09±18.41)s、(21.42±15.53)s、(16.96±8.35)s、(10.24±3.75)s]相比,IO组大鼠在第2 ~ 5天的平均潜伏期[(56.68±30.65)s、(58.21±36.09)s、(36.58±13.54)s、(27.29±14.30)s]明显延长(t=8.57,6.81,9.51,7.12,均P<0.01)。在第6天撤掉平台的空间探索实验中,与Sham组[(41.89±3.89)%]相比,IO组在平台象限内停留的时间百分比[(25.46±3.56)%]明显降低(t=24.06,P<0.01)。Western blot结果显示,IO组大鼠海马内TfR1(2.10±0.48)、p-AMPK(0.74±0.10)、LC3(1.11±0.40)、Beclin1(1.05±0.20)的相对表达水平较Sham组[TfR1(0.11±0.18)、p-AMPK(0.19±0.02)、LC3(0.22±0.11)、Beclin1(0.17±0.02)]明显升高(t=1.58,14.58,10.06,20.65,均P<0.01)。HE染色结果显示,与Sham组相比,IO组大鼠海马内神经元细胞排列稀疏、形态不规整、细胞数明显减少。透射电镜结果显示,与Sham组相比,IO组大鼠海马内神经元内自噬小体数量增多。结论铁超载可能通过提高海马区内的自噬水平发挥其神经毒性作用,引发认知功能障碍。