简介：内毒素/脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰阴性菌内毒素的主要成分,是导致感染和中毒性休克乃至患者死亡的重要原因之一.目前临床上尚无既能杀菌又能中和LPS的有效手段[1].因此加强对LPS致病机制的深入研究,将有助于寻找新的治疗中毒性休克的途径.本研究采用双荧光抗体标记法,通过流式细胞仪观察LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)胞膜上Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的变化,以探讨其致病机制.

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）-AC013472.3对脂多糖（LPS）刺激大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383细胞）分泌肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法以NR8383细胞分别建立lncRNA-AC013472.3沉默及过表达模型，沉默模型分为乱序无意义阴性小干扰RNA序列（si-con）组（转染si-con的NR8383细胞）、LPS+si-con组（10 μg/L的LPS处理转染si-con的NR8383细胞24 h）、小干扰RNA（siRNA）组（转染siRNA的NR8383细胞）和LPS+siRNA组（10 μg/L的LPS处理转染siRNA的NR8383细胞24 h）；过表达模型分为空质粒（p-con）组（转染p-con的NR8383细胞）、LPS+p-con组（10 μg/L的LPS处理转染p-con的NR8383细胞24 h）、lncRNA过表达质粒（plncRNA）组（转染plncRNA的NR8383细胞）和LPS+plncRNA组（10 μg/L的LPS处理转染plncRNA的NR8383细胞24 h），实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测各组细胞中TNF-α mRNA相对表达量；Western印迹法检测TNF受体相关因子-6（TRAF-6）和磷酸化的核因子-κB（NF-κB）p65蛋白相对表达量。结果在沉默模型中，LPS+si-con组TNF-α mRNA相对表达量、TRAF-6和NF-κB p65蛋白相对表达量均显著高于si-con组（2.040±0.195比1.048±0.207、0.473±0.022比0.293±0.076和0.469±0.062比0.252±0.038）（均P<0.05）；LPS+siRNA组TNF-α mRNA相对表达量、TRAF-6和NF-κB p65蛋白相对表达量均显著高于siRNA组（4.158±0.119比1.028±0.019、0.700±0.104比0.231±0.023和0.771±0.095比0.258±0.050）（均P<0.05）；LPS+siRNA组各指标相对表达量显著高于LPS+si-con组（均P<0.05）。在过表达模型中，LPS+p-con组TNF-α mRNA相对表达量、TRAF-6和NF-κB p65蛋白相对表达量均显著高于p-con组（1.961±0.169比0.999±0.143、0.533±0.047比0.247±0.020和0.565±0.108比0.276±0.048）（均P<0.05）；LPS+plncRNA组TNF-α mRNA、TRAF-6和NF-κB p65蛋白相对表达量均显著高于plncRNA组（1.322±0.110比1.043±0.093、0.347±0.035比0.232±0.023和0.405±0.072比0.268±0.031）（均P<0.05）；LPS+plncRNA组各指标相对表达量显著低于LPS+p-con组（均P<0.05）。结论lncRNA-AC013472.3可能通过抑制NF-κB信号通路的激活，从而抑制LPS刺激NR8383细胞分泌TNF-α。

简介：摘要目的观察脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织中微循环的变化，探讨乙酰化白藜芦醇对其干预作用及机制。方法32只SD大鼠随机分为空白对照组、LPS处理组、乙酰化白藜芦醇预处理组和白藜芦醇预处理组，每组8只。采用气管内滴注LPS(5 mg/kg)的方法制作急性肺损伤动物模型，观察病理变化、肺组织湿/干重比值，用伊文思蓝法检测肺微血管通透性，用酶联免疫吸附试验法检测肺组织中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量，用蛋白质印迹法检测细胞骨架重构相关蛋白FAK、cofilin的表达变化，免疫荧光观察肺微血管内皮细胞单层细胞间隙改变情况。结果LPS干预4 h后，大鼠肺部损伤明显，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量增高，肺湿/干重比值及通透性明显增加，FAK-cofilin通路明显激活，肺微血管内皮单层细胞间隙明显增加；乙酰化白藜芦醇预处理显著减轻了LPS导致的急性肺损伤，减少了炎症因子的释放，并且抑制了FAK-cofilin通路的激活及肺微血管内皮单层细胞间隙的增加。结论肺微循环的改变参与了LPS诱导肺损伤的发生发展，乙酰化白藜芦醇能够通过抑制FAK-cofilin通路减轻肺损伤。

简介：摘要目的研究盲肠结扎穿刺(CLP)和脂多糖(LPS)联合诱导建立大鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型的可能性，探讨其意义和理论依据。方法将176只SD大鼠随机分为4组，每组44只。(1)CLP组；(2)尾静脉注射2 mg/kg LPS(LPS组)；(3)CLP和尾静脉注射2 mg/kg LPS联合诱导(CLP＋LPS组)；(4)假手术后尾静脉注射2 ml/kg生理盐水(对照组)。每组分为4个亚组，分别在4、12、24、48 h检测大鼠呼吸频率，支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数、多形核白细胞百分比、总蛋白含量、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6(IL-6)水平，测定肺湿干重比，对肺组织进行病理组织学观察和透射电镜观察。结果与对照组相比，呼吸频率、总蛋白含量、肿瘤坏死因子α、白细胞总数、多形核白细胞百分比、IL-6水平在4 h时LPS组和CLP＋LPS组升高(P值均<0.05)，CLP组在12 h升高(P值均<0.05)，24 h时CLP组和CLP＋LPS组升高(P值均<0.05)，而LPS组趋于恢复。在所有时间点，CLP＋LPS组的呼吸频率和IL-6水平升高(P值均<0.05)。病理形态学和透射电镜观察到24 h CLP＋LPS组炎性反应、肺泡细胞损伤最为严重。结论CLP和LPS联合诱导建立的大鼠模型与单独的CLP和LPS模型相比，肺损伤出现早，持续时间长，在临床表现和肺损伤方面更接近ARDS的诊断标准，是一种较理想的ARDS模型。

简介：摘要目的研究舒洛地特（SLX）对脂多糖作用下人腹膜间皮细胞（HPMC）白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法用人腹膜间皮细胞株传代培养。随机分组（1）正常对照组；（2）不同浓度脂多糖组（1、10、100μg/ml）;(3)不同时间组10μg/mlLPs作用于HPMC6、12、24、48、72h;(4)10μg/mlLPs+舒洛地特组（50、400、800、1200μg/ml）作用48h。ELISA法检测细胞培养上清液中IL-6、TGF-β1的表达。结果脂多糖诱导HPMC的IL-6、TGF-β1蛋白的表达增高呈浓度依赖性（P﹤0.05）；舒洛地特能降低脂多糖所致的腹膜间皮细胞IL-6、TGF-β1的表达（P﹤0.05）。结论脂多糖可上调HPMCHA、IL-6、TGF-β1的表达，舒洛地特可抑制脂多糖所致的IL-6、TGF-β1过度表达，以预防和延缓腹膜炎和腹膜纤维化的发生与发展。

简介：目的评价嗜肺巴氏杆菌外膜蛋白(OMP)和脂多糖(LPs)作为血清学诊断抗原的敏感性和特异性.方法用OMP、LPS和全菌(WC)作为Westernblot和ELISA的诊断抗原检测自然感染和实验感染嗜肺巴氏杆菌小鼠相应的IgG抗体滴度,同时测定3种抗原与实验动物常见致病菌的交叉反应.结果与嗜肺巴氏杆菌自然感染和实验感染小鼠血清的ELISA反应中,不同时期,LPS作为诊断抗原时血清抗体阳性率最高,WC次之,OMP最低.自然感染小鼠群中,出生4周LPS抗体阳性率即可达80%,而同期的WC和OMP仅为25%和20%,故LPS敏感性最高.与实验动物常见致病菌免疫血清和阴性种鼠血清的ELISA反应中,WC抗原表现出较高的吸光度(A)值,经Westernblot证实,其反应为非特异性反应,LPS抗原特异性最强,OMP抗原次之.结论混合多株具有型或种特异性的OMP或LPS作为ELISA的诊断抗原,无论从特异性和敏感性上均高于全菌抗原.

简介：目的观察不同浓度脂多糖（LPS）诱导人支气管上皮细胞（HBEC）不同时间8防御素-3（hBD-3）的表达，探索hBD-3在呼吸道感染中的作用及与细菌感染的量效关系、时效关系，为人工调控其分泌、防治呼吸道感染进行基础研究。方法不同浓度LPS（0．01、0．1、1、10mg／L）诱导HBEC后，分别在不同时间点（1、2、4和8h）用RT—PCR法检测hBD-3mRNA的表达；同时用0．1mg／LLPS诱导HBEC4h后采用免疫细胞化学检测hBD-3蛋白的表达。结果0．1mg／LLPS诱导HBEC4h后，可见培养的支气管上皮细胞胞质呈棕褐色阳性颗粒，hBD-3蛋白明显表达；不同浓度LPS诱导细胞相同时间后，在同一时间点随浓度增加hBD-3mRNA表达亦随之增加，不同浓度组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）；相同浓度LPS在诱导细胞不同时间后，在同一浓度组hBD-3mRNA表达亦随时间而增加，不同时间组间比较差异有统计学意义（P％0．01）。结论hBD-3在HBEC胞质有表达，LPS能诱导HBEChBD-3表达上调，LPS诱导hBD-3表达在一定范围内呈剂量和时间依赖性，hBD-3可能参与气道对LPS最初的防御反应。

简介：

简介：本文主要合成了五种乙二醇双酯，两种马来酸双酯，并研究了它们对皮革的加脂性能。实验中采用了外加表面活性剂的乳化方式进行了加脂实验。从皮革对测脂的吸收，皮革撕裂强度，伸长率，抗张强度等方面进行了考察。

简介：多糖各组分的纯度鉴定和分子量测定经HPLC分析得2JLⅠ、2JLⅠⅠ经过纯化后都为单一峰（见图2～3）,结果得两个多糖组分2JLⅠ和2JLⅡ,多糖各组分的纯度鉴定和分子量测定取2JLⅠ、2JLⅡ适量

简介：从被超声波破碎的猴头菌发酵菌丝细胞热水提取液中,经乙醇分级分离得到单一级分,HPA经SepharoseCL-6B柱层析测得其相对分子质量为4.56×105.经部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解和甲基化分析确定此多糖以(1→4)糖苷键连接,平均每8个残基上有1个分枝,分枝点在O-3上,分枝末端残基为Glc1-.

简介：摘要目的探讨miRNA-20a在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的A549细胞焦亡与炎症反应中的作用与调控机制。方法培养人肺泡上皮A549细胞，以LPS为刺激物建立细胞焦亡及炎症反应模型，给予LPS+三磷酸腺苷刺激为LPS组，未给予刺激为空白对照组，验证模型是否成功。将A549细胞根据转染物质分为miRNA-20a模拟物（mimics）组、mimics-阴性对照（negative control，NC）组、miRNA-20a抑制物（inhibitor）组和inhibitor-NC组，构建过表达及沉默miRNA-20a的A549细胞模型，各组细胞在转染24 h后给予LPS+三磷酸腺苷刺激。构建TLR4-3'UTR双荧光素酶报告基因载体质粒，包括野生型（WT）载体质粒TLR4-3'UTR-WT1、TLR4-3'UTR-WT2及相应的变异型（MUT）载体质粒TLR4-3'UTR-MUT1、TLR4-3'UTR-MUT2，用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-20a的靶基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹试验及酶联免疫吸附试验检测各组焦亡标志因子消皮素D（gsdermin D，GSDMD），炎症因子凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β），以及信号分子Toll样受体4（Toll-like receptor-4，TLR4）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）mRNA及蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞TLR4表达和NF-κB入核情况。结果LPS组A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达量均高于空白对照组（P<0.05），模型建立成功。mimics组miRNA-20a表达量高于mimic-NC组（P<0.05），inhibitor组miRNA-20a表达量低于inhibitor-NC组（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验显示，TLR4-3'UTR-WT与miRNA-20a mimics共转染组的相对荧光值低于TLR4-3'UTR-WT与mimics-NC共转染组（P<0.05）。mimics组LPS介导的A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均低于mimics-NC 组（P<0.05），inhibitor 组GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均高于inhibitor-NC 组（P<0.05）。结论在LPS诱导的A549细胞焦亡及炎症反应中，miRNA-20a可能经TLR4/NF-κB 信号通路对细胞焦亡及炎症反应产生抑制作用。

简介：摘要目的研究微RNA-126（microRNA-126，miR-126）对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下巨噬细胞极化的影响。方法用5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h，以及转染miR-126模拟物或阴性对照物24 h后再行5 mg/L Pg-LPS刺激人单核细胞源性巨噬细胞48 h，实时定量PCR、酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、蛋白质印迹法分别检测miR-126、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）以及M1型极化相关通路：核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路的变化。结果Pg-LPS刺激巨噬细胞48 h后，与非Pg-LPS刺激组各因子mRNA水平（TNF-α：1.000±0.020，iNOS：1.125±0.064，miR-126：1.004±0.113，IL-10：1.003±0.053，Arg-1：1.130±0.061）相比，Pg-LPS刺激后TNF-α和iNOS的mRNA水平（3.105±0.278、4.296±0.003）均显著上升（t=6.53，P=0.003；t=42.63，P<0.001），miR-126、IL-10、Arg-1表达（0.451±0.038、0.545±0.004、0.253±0.017）均显著下降（t=7.95，P=0.001；t=7.36，P=0.002；t=11.94，P<0.001）。iNOS、TNF-α、Arg-1、IL-10蛋白表达量变化与mRNA变化趋势一致。同时，磷酸化NF-κB p65（phospho-NF-κB p65，p-p65）、磷酸化胞外信号调节激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase，p-ERK）、磷酸化p-38 MAPK（phospho-p38 MAPK，p-p38）相对蛋白表达均显著上升（t=2.78，P=0.013；t=18.70，P<0.001；t=5.65，P=0.005）。转染miR-126模拟物后，Pg-LPS刺激下与转染阴性对照物组各因子mRNA水平（TNF-α：1.141±0.197，iNOS：1.173±0.115，IL-10：1.032±0.138，Arg-1：0.933±0.044）相比，TNF-α、iNOS的mRNA水平（0.342±0.022、0.588±0.085）均显著下降（t=5.35，P=0.006；t=5.05，P=0.007），而IL-10、Arg-1的mRNA水平（1.786±0.221、2.152±0.229）均显著上升（t=3.71，P=0.021；t=6.21，P=0.003）。同时，iNOS、p-p65、p-ERK、p-p38相对蛋白表达水平均显著下降（t=13.00，P<0.001；t=6.98，P=0.002；t=10.86，P<0.001；t=8.32，P=0.001），Arg-1蛋白表达则显著上升（t=12.08，P<0.001）。结论Pg-LPS可促进巨噬细胞的M1型极化；miR-126通过下调M1型极化相关通路，抑制Pg-LPS对巨噬细胞向M1型极化的作用。

简介：摘要目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）中的作用及可能的发病机制。方法①体内实验：将24只SPF级野生C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、ALI/ARDS模型组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组和EP对照组，每组6只。采用腹腔注射20 mg/kg LPS制备ALI/ARDS模型，正常对照组和EP对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水；之后EP治疗组和EP对照组小鼠分别腹腔注射40 mg/kg HMGB1抑制剂EP。6 h后处死小鼠取肺组织，采用免疫荧光技术检测小鼠肺组织硫酸乙酰肝素（HS）、多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）、乙酰肝素酶（HPA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达。取小鼠眼眶血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清HMGB1含量。②体外实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）随机分为正常对照组、HUVECs损伤组（1 mg/L LPS处理6 h）、HMGB1组（1 μmol/L重组HMGB1处理6 h）、HMGB1+EP组（重组HMGB1处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）、LPS+EP组（LPS处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）和EP组（1 μmol/L EP处理6 h）。采用免疫荧光技术检测内皮细胞HS、SDC-1、HPA和MMP-9的表达。结果①体内实验：光镜下显示，LPS制模后肺泡间隔增厚，肺泡间隙有大量炎症细胞浸润。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组小鼠肺组织HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.80±0.20比0.53±0.02，SDC-1（荧光强度）：0.72±0.02比0.51±0.01，均P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：2.36±0.05比3.00±0.04，MMP-9（荧光强度）：2.55±0.13比3.26±0.05，均P<0.05〕；EP对照组上述指标表达量均无明显变化。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组血清HMGB1含量明显降低（μg/L：131.88±16.67比341.13±22.47，P<0.05）；EP对照组无明显变化。②体外实验：与HMGB1组相比，HMGB1+EP组内皮细胞HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.83±0.07比0.56±0.03，SDC-1（荧光强度）：0.80±0.01比0.61±0.01，均P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：1.30±0.02比2.29±0.05，MMP-9（荧光强度）：1.55±0.04比2.50±0.06，均P<0.05〕；EP组HS、SDC-1、HPA和MMP-9表达量均无明显变化。结论HMGB1参与LPS所致内皮细胞多糖包被的损伤，导致肺通透性增加，抑制HMGB1可减轻肺损伤。

简介：摘要目的探究在脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS ）诱导的大鼠膀胱炎中核因子-κB (nuclear factor kappa B ，NF-κB）信号通路的激活对膀胱中胶原蛋白分泌的影响。方法选用体重200~230 g的健康雌性SD大鼠48只，按数字随机法随机分为空白对照组（A组）、假手术组（B组）、LPS灌注2周组（C组）、LPS灌注4周组（D组）、抑制剂对照组（E组）和抑制剂组（F组），每组8只。用LPS对C、D、E、F组大鼠进行反复灌注诱导大鼠膀胱炎的发生，用二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidin-edithiocarbamic acid ，PDTC）作为NF-κB抑制剂。所有大鼠处死前均进行6 h内的排尿次数记录。对膀胱标本进行HE染色评估膀胱的炎症情况，再通过免疫组化染色检测膀胱组织中NF-κB p65、磷酸化p65、Col1和Col3A1蛋白的含量表达。结果LPS灌注组大鼠膀胱的HE染色结果显示黏膜下层水肿、黏膜上皮增生、糜烂，炎症细胞浸润明显。LPS灌注组中膀胱上皮中Col1和Col3A1蛋白的表达均较对照组升高，差异有统计学意义（P<0.05）。NF-κB p65及磷酸化p65在LPS灌注组中的表达也均较空白对照组及pH7.4磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）灌注组升高，差异有统计学意义（P<0.05 ）。在抑制剂组中，大鼠膀胱中NF-κB p65的活化受到了抑制；同时，大鼠膀胱的炎症浸润及尿频症状均比对照组有所改善；而在胶原蛋白表达方面，抑制剂组膀胱上皮中Col1蛋白的含量比对照组降低，差异有统计学意义（P<0.05），Col3A1蛋白的含量未见降低，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论NF-κB信号通路为大鼠膀胱炎症刺激膀胱胶原沉积过程中的重要信号通路，该通路的激活可能是纤维化过程的重要因素；而PDTC作为一种NF-κB抑制剂，不仅能有效改善大鼠的膀胱炎症情况及尿频症状，还能一定程度上抑制膀胱上皮细胞的胶原蛋白的合成分泌，延缓纤维化进程。

简介：摘要目的探讨双环醇对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肾损伤(AKI)的肾保护作用及其相关机制。方法选择2018年5月至2018年6月自武汉大学动物实验中心购买的雄性SD大鼠48只，随机分为五组：对照组(12只)、LPS诱导组(LPS组，12只)和三个双环预处理组(LPS+双环醇组，24只)，其中低剂量组(LPS+BL组)、中剂量组(LPS+BM组)、高剂量组(LPS+BH组)各8只。在LPS+双环醇组中，大鼠连续3 d接受3种不同剂量的双环醇灌胃。在最后一次给药后3 h，LPS组和LPS+双环醇组接受腹腔注射LPS诱导AKI模型。采用血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、组织学检查评估肾损伤。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。行TUNEL染色评估肾细胞凋亡，采用Western blot法测定Bax、Bcl-2、Caspase-3、TLR4、NF-κB/p65和p-IκBα蛋白的表达。结果与LPS组比较，双环醇预处理各组的BUN和Scr水平均显著降低(均P<0.01)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均降低(均P<0.05)，IL-10表达水平显著升高(P<0.001)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的肾损伤评分均明显降低(均P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的凋亡细胞数量均明显减少(均P<0.05)。与LPS组比较，双环醇预处理各组的Bax和裂解Caspase-3的蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05)；与LPS组比较，双环醇预处理各组的TLR4、核NF-κB/p65和p-IκBα蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05)。结论双环醇对LPS诱导的AKI具有肾保护作用，其相关机制与通过TLR4/NF-κB信号通路调节炎性细胞因子的产生和Bax/Bcl-2依赖的凋亡级联有关。

简介：灯盏乙素对APAP致肝损伤小鼠肝脏指数和ALT的影响灯盏乙素各个剂量组与模型组比较肝脏指数均无明显差异(P>,灯盏乙素对正常小鼠血清ALT的影响灯盏乙素200mg·kg-1剂量组小鼠血清ALT活性,灯盏乙素对LPS致肝损伤小鼠脏器指数和ALT的影响LPS致肝损伤模型组小鼠与正常组比较

简介：摘要目的探讨二苯乙烯苷（2，3，5，4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside，TSG）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）诱导牙龈上皮细胞分泌促炎细胞因子的影响。方法实时荧光定量PCR、Westernblot测定不同时间点、不同浓度TSG刺激后HO-1mRNA以及蛋白的表达；CoPP、ZnPP干预处理后分别检测IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平。结果RT-PCR、Westernblot结果显示，HO-1mRNA和蛋白水平均随TSG浓度增加而升高，并于TSG处理后12h达到最高值；用HO-1抑制剂ZnPP处理后牙龈上皮细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-6水平明显高于TSG对照组（P<0.05），而添加了HO-1激动剂CoPP后牙龈上皮细胞IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平与TSG组无显著差异（P>0.05）。结论二苯乙烯苷能够通过上调HO-1，抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的牙龈上皮细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-6。

简介：摘要目的探讨中性粒细胞颗粒蛋白（NGP）对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的影响及其调控机制。方法体外培养NGP高表达小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞（NGP/RAW）、阴性对照空载体RAW264.7细胞（NC/RAW）、NGP敲除RAW264.7细胞（NGP KO/RAW）和野生型RAW264.7细胞（WT/RAW），取对数生长期细胞分别给予10 mg/L的LPS（LPS组）或磷酸盐缓冲液（PBS组）进行刺激。用Griess方法检测上清中NO含量；用定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测iNOS蛋白及磷酸化转录激活因子1（p-STAT1）蛋白表达。结果与PBS组相比，在LPS刺激后各时间点，4组细胞中iNOS mRNA表达和NO产生量均明显增加，iNOS mRNA表达于LPS刺激后12 h达峰值（2-ΔΔCt：NC/RAW细胞为38.45±1.34比1.00±0.00，NGP/RAW细胞为56.24±2.41比1.45±0.30，WT/RAW细胞为37.84±1.52比1.00±0.00，NGP KO/RAW细胞为5.47±0.62比0.98±0.40，均P<0.05），NO产生量于LPS刺激后24 h达峰值（μmol/L：NC/RAW细胞为24.15±1.26比0.15±0.04，NGP/RAW细胞为58.80±2.11比0.18±0.02，WT/RAW细胞为25.04±1.80比0.16±0.02，NGP KO/RAW细胞为2.42±0.38比0.12±0.03，均P<0.05）。给予LPS刺激后，NGP/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较NC/RAW细胞明显增加〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为8.42±0.59比4.63±0.37，6 h为27.16±1.60比14.25±1.02，12 h为56.24±2.41比38.45±1.34；NO（μmol/L）：6 h为4.12±0.25比2.23±0.17，12 h为16.50±1.52比6.35±0.39，24 h为58.80±2.11比24.15±1.26，均P<0.05〕；同时，p-STAT1和iNOS蛋白表达明显增强（p-STAT1/GAPDH：0 h为4.26±1.84比1.00±0.32，2 h为20.59±4.97比0.93±0.21，6 h为141.99±10.99比11.17±2.11；iNOS/GAPDH：0 h为1.27±0.86比1.00±0.22，2 h为7.94±1.94比2.01±0.92，6 h为24.24±4.88比3.72±1.11，均P<0.05），说明NGP可以通过促进转录激活因子1（STAT1）通路磷酸化来增加iNOS表达，进而使NO生成增多。LPS刺激后，NGP KO/RAW细胞内iNOS mRNA表达和NO生成量较WT/RAW细胞明显减少〔iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：2 h为2.46±0.31比4.22±0.18，6 h为3.61±0.44比13.02±1.34，12 h为5.47±0.62比37.84±1.52；NO（μmol/L）：6 h为1.22±0.19比2.01±0.12，12 h为1.60±0.44比5.15±0.62，24 h为2.42±0.38比25.04±1.80，均P<0.05〕。说明NGP敲除后iNOS活化减少，进而使NO生成减少。结论NGP可通过激活STAT1/iNOS通路正向调控活化巨噬细胞中NO的生成。

简介：目的研究紫草素抑制由脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症的机制。方法以淀粉培养基注射BALB/c小鼠腹腔，诱导并分离巨噬细胞，以APC标记F4/80染色，并用流式细胞仪检测分离巨噬细胞情况;用1mg?1T1的LPS刺激上述分离的巨噬细胞，分组如下:DMSO溶剂对照组，LPS对照组，LPS+低剂量紫草素组(0.1|junal*1T1);LPS+中剂量紫草素组（1|junol?高剂量紫草素组（10ijund?IT1);通过ELISA和实时定量PCR(qRT-PCR)方法分别测定各处理组培养上清液以及细胞中肿瘤坏死因子-ct(TNF-c〇、白细胞介素-lp(IL-lp)、白细胞介素^6(11^)和白细胞介素-IO(IL-IO)的表达情况;Westemblot分别测定Toll样受体4(TLR4)和核因子-kB(NF-kB)的P65亚基磷酸化表达情况。结果流式细胞检测可知，APC标记的F4/80染色巨噬细胞的纯度可达97.8%;ELISA和实时定量PCR结果显示，紫草素处理后可以抑制由LPS刺激细胞因子TNF-ct、IL-lp和IL-6的表达（P<0.05)，并增加IL-10的表达（P<0.05)，且呈现出一定的浓度依赖性；Westernblot结果显示，紫草素能下调由LPS刺激的TLR4的表达水平和NF-kB的P65亚基磷酸化表达。结论紫草素的抗炎机制可能是通过TLR4介导的信号通路活化NF-kB,抑制IL-lp、IL-6和TNF-ct的分泌，并促进IL-10的分泌。