邓学军南华大学附一医院421001
【摘要…目的：评价HE染色在临床病理诊断中的应用效果，总结工作经验。方法：回顾性分析3422例HE染色质量报告，取53例需进行HE染色病理检查疑似慢性乙型肝炎脂肪肝患者，肝区穿刺活检，经10%甲醛溶液固定、石蜡包埋、连续切片，行HE染色，镜下观察选择病变最严重区域观察。结果：效果不满意者39例，占1.14%，其中染色不均匀19例、染色不清晰10例、组织切片脱落6例、切片污染3例、染色困难1例；肝区穿刺活检取样HE染色效果好，细胞结构清晰，可见肝细胞变性变化，包括疏松样变、气球样变、肝细胞拥挤排列、嗜酸性改变、脂肪变性、灶性坏死、碎屑样坏死、胆色素沉着、炎细胞浸润、肝间质改变等。结论：HE染色是临床病理诊断重要技术，是石蜡包埋组织切片病理研究重要步骤，应从细节入手，落实整个环节质量管理。
【关键词…病理诊断；传统切片法；HE染色【中图分类号…R36【文献标识码…A【文章编号…1276-7808（2015）-04-026-02【abstract…objective：toevaluatetheefficacyoftheHEstaininginthediagnosisofclinicalpathology，summarizestheworkexperience.Methods：aretrospectiveanalysisof3422casesofHEstainingqualityreport，needtoHEdyeingpathologicexaminationin53casesofsuspectedofchronichepatitisbpatientswithfattyliver，liverbiopsy，fixedby10%formaldehydesolution，paraffinembedding，serialsection，HEstaining，themicroscopicobservationchoicelesionsisthemostseriousregionobservation.Results：theeffectisnotsatisfiedwiththe39cases，accountingfor1.14%，ofwhich19casesunevendyeing，dyeing，10caseswerenotclear，tissuesliceoff6cases，slicepollution（3cases），dyeingdifficultiesin1case；LiverareabiopsysamplingHEdyeingeffectisgood，thecellularstructureisclear，visiblelivercelldegenerationchanges，includingloosechange，ballooning，livercellsarrangecrowded，eosinophilicchange，fattydegenerationandfocalnecrosis，fragmentalnecrosisandbilepigmentADcool-headed，inflammatorycellinfiltration，hepaticinterstitialchange，etc.Conclusion：HEdyeingisanimportanttechnology，clinicalpathologicaldiagnosisisimportantsteptoparaffinembeddingbiopsypathologystudy，shouldfromthedetailsoftheimplementationoftheentirelinkqualitymanagement.【keywords…thepathologicaldiagnosis；Traditionalslicemethod；HEdyed
现代科技日新月异，疾病诊断与治疗技术发展迅速，在疾病发展早期，利用显微镜从细胞角度进行观察、研究，界定组织结构是否正常，及早进行病理诊断，选择性开展手术或保守治疗有助于改善患者预后[1]。石蜡组织切片制备技术是进行病理诊断的基础性工作，极大的推动了医学发展进程，为医师认知、诊断疾病提供了捷径。切片染色工作直接影响病理医生诊断。传统的石蜡组织切片染色工时长，制作步骤较多，一般需要2-3d，同时对切面的质量要求较高，不利于术中诊断，可能延误疾病治疗。染色是制片的重要步骤，染色又可分为常规染色与苏木精—伊红（HE）染色，染色的好坏直接影响细胞观察的科学性、病理学诊断的有效性。本次研究就本院HE染色制片法实际应用情况进行分析。
1资料及方法1.1一般资料以本院既往2012年1月～2014年12月，收治并接受HE染色进行病理诊断标本作为研究对象。共取标本3422例，来自于3422例患者，其中男2101例、女1321例。标本来源：手术切除2259例、内镜取得771例、穿刺活检取得390例。为系统评价HE染色效果，连续取2014年5月～6月，需进行HE染色病理检查患者作为研究对象，均为取样相对困难的肝区穿刺活检，均为疑似慢性乙型肝炎脂肪肝患者，共纳入患者53例，其中男45例、女8例，年龄15～53岁、平均（43.2±4.4）岁。
1.2方法1.2.1HE染色切片放入二甲苯中50-100min，再次放置于二甲苯中5-10min，95%酒精、100%酒精、95%酒精、95%酒精、90%酒精、80%酒精放置1min脱水，自来水洗1min，放入苏木精染色浸洗并染色10-15min，自来水洗30s，1%盐酸酒精分化30s，流动水冲洗15～20min，1%盐酸酒精浸染3-5min，90%酒精或95%酒精分化30s，95%酒精、95%酒精、95%酒精30s，100%酒精1min，100%酒精1-2min，碳酸二甲苯1min，二甲苯、二甲苯、二甲苯1-2min，阿拉伯树胶或加拿大树胶封固寸片。
1.2.2研究方法调取既往标本HE染色结果报告进行回顾性分析。以疑似肝炎脂肪肝患者作为研究对象，组织经超声引导下穿刺针针吸获得，每位患者取肝组织2条，质量满足需要，经10%甲醛溶液固定、石蜡包埋、连续切片，行HE染色与VB弹力、GS网状及VG胶原纤维染色、Co-IV抗原免疫染色，镜下观察选择病变最严重区域观察，进行诊断。
1.3统计学处理数据资料以SPSS18.0软件包处理，计数资料以n（%）表示。
2结果2.1回顾性性分析3422份标准，其中效果不满意者39例，占1.14%。不能满意原因：染色不均匀19例、染色不清晰10例，组织切片脱落6例，切片污染3例，染色困难1例。
2.2实验部分镜下见：①染色效果好，细胞结构清晰，可见肝细胞变性变化，可见不同程度疏松样变、气球样变、肝细胞拥挤排列，3例嗜酸性改变、4例脂肪变性，脂肪变性可同时存在；②部分见灶性坏死、碎屑样坏死、胆色素沉着、炎细胞浸润、肝间质改变，染色后对细胞结构显示较清晰。
3讨论3.1HE染色病理诊断结果影响因素3.1.1染色前取材的好坏直接影响切片质量，本组患者多为手术取材，切除组织量大，易于取样，但穿刺、纤维镜中取材所取得组织可能质量不佳，特别是穿刺活检取材，取得组织量较少，也可能发生破碎。本组不合格活检标本中未见穿刺取样者，这与穿刺取样质量控制较理想有关。
取材组织范围需大小适宜、厚薄均匀，过厚否可能影响固定、脱水、透明、浸蜡效果，切片出现发软、灰白、掉落情况，过薄可能出现脱水、透明、浸蜡过度情况，组织发硬、变脆，甚至可能出现粉末状。
特别是人部分器官组织结构特征并不典型，对取样质量要求较高。
标本固定应充分，是影响制片质量的关键因素。固定液一般取4%多聚甲醛、戊二醛，固定是为了让组织成分维持活体结构，预防蛋白质的活性成分坏死、细菌分界、自溶。固定还有助于细胞结构硬化，易于染色。固定剂常用甲醛、乙醇、铬酸等，不同固定剂固定效果不尽相同。甲醛水溶液渗透力强，固定效果好，组织维持效果优良。临床常用4%多聚甲醛或10%磷酸缓冲福尔马林进行病理切片固定剂，具有廉价、经济实惠、对细胞核与脂肪固定效果好等有点，适用于常规HE染色。但需注意的是，若固定剂配置时间过久、量不充分可能致切片效果不佳。固定的好坏直接影响后续环节。
脱水透明是石蜡组织切片第三个步骤，脱水常用酒精脱水，经济实惠、效果好。本院也用酒精脱水，酒精脱水效果较理想，但穿透能力快，可能促组织收缩，一般应按梯度脱水，有助于逐渐脱去水分。
当然，病理诊断所取得组织较少，材料较少，可从高浓度酒精开始脱水，但脱水时间不宜过长，否则可能物极必反，使组织过硬，易发生破碎。本组6例组织脱落便可能与组织过脱水过久，组织过硬有关。
透明是祛除组织中杂志的必要步骤，一般采用酒精、二甲苯透明，本组采用二甲苯。透明的时间不宜过长，也不应过短，若太短可能致透明不彻底，石蜡包埋效果不佳，透明时间过长也可能致组织过硬。
浸蜡包埋过程复杂、操作繁复，质量控制不易。不同来源的组织样差异较大，对浸蜡要求也不尽相同。浸蜡后，组织结构应透明质地坚硬，若未达标，可能是脱水不足所致，必要时需返工。
切片通常以切片完成，本院采用一次性刀片制片的切片机切片，具有手摇以及自动两种模式，使用便捷，蜡带均匀，只要操作得当，很少出现蜡带断裂情况。但需注意的是，切片前应做好切片机维护，确保刀片质量。刀片应平整，无缺损，厚薄均匀。长时间使用可能影响刀片质量。手摇式切片机切片时用力应均匀一致，避免用力过猛，否则可能致切片厚薄不均。
贴片是使组织贴覆在载玻片的一个步骤，可展平细胞结构，保证载玻片的质量、干净是贴片的关键，一般采用蒸馏水聚集实验测试载片有无油污、是否干净。
3.1.2染色HE染色既有化学反应，又有物理作用参与。HE染色制作组织切片常用的碱性染料为苏木精，H既苏木精，可将细胞核染成蓝色，既细胞嗜碱性。E既为伊红，含羟基等酸性助色团，是一种酸性染色剂，可将细胞质染为红色。碱性或酸性亲和力均不强者称之为中性。当然有些组织（髓性组织）还常经过硝酸银染色处理。HE染色通常将细胞核染成深紫蓝色、将细胞浆染色粉红色，胶原纤维被染成淡红色，嗜酸性细胞及嗜碱性颗粒成为鲜红色[2]。本组试验中，以慢乙型肝炎肝硬化患者作为研究对象，经HE染色后便通过蓝红色分布，判断有无嗜酸性改变，以诊断炎性浸润。
3.2HE染色应注意事项石蜡组织切片在染液中浸入的时间应适宜。如染色时间常规定为10min，若时间太长，可能致染色过深，若太短则染色可能过浅。本次研究中，既往出现染色不均匀19例，是致标本质量不佳的最常见原因。染液配置时间不易过久，应该现配现用，否则可能出现染色污染，回顾性分析中出现1例染色污染情况。配置的染液应密封保存，避免挥发致染液浓度下降。在进行苏木素染色时，浸润盐酸酒精是为了祛除不应该染的染色，是进行分色的重要步骤，盐酸酒精浓度为0.25%、0.5%、1%等。伊红染色应快速，着色时间短，但时间应才能够分，而后以高浓度的酒精分色，若浓度过低，可能导致伊红褪色。
染色过程中出现对比不明显的主要原因可能为：①甲醛液中固定时间过长；②切片过厚；③组织固定不佳；④苏木精、伊红染色分化不良。
3.3小结HE染色是临床病理诊断重要技术，是石蜡包埋组织切片病理研究重要步骤；HE染色可明显细胞结构，获得多种病理改变特征；HE染色不佳与染色、染色前步骤有关，应从细节入手，落实整个环节质量管理。
参考文献：[1]翁秀琴，沈成武.制作染色石蜡切片的关键技术[J].医药论坛杂志，2005，26（21）：80-81.[2]马恒辉.组织切片常见问题与对策[J].临床与实验病理学杂志，2009，25（2）：211-214.
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