食品微生物的检测能力验证

食品微生物的检测能力验证

李辉

黑龙江省鸡西市疾病预防控制中心 158100

【摘 要】为了保证实验室在食品当中微生物检验方面有良好准确度,应认识到实验室方面能力验证的重要性,并能结合实验需要以及能力验证标准,制定科学的食品当中微生物检验方面能力验证方案,使实验室检验能力保持在较高水准｡本文就食品当中微生物检验方面能力验证进行了分析｡

【关键词】微生物;食品;检验;能力验证

1材料以及方法

1.1材料分析

(1)实验样品

在本次能力验证操作中以6瓶冻干类型细菌混合物为样品,从样品标示方面来看,这些菌类包括了大肠菌群､智贺菌､金葡菌､单增､菌落总数｡

(2)实验设备

在本次试验中还使用了恒温类型的培养箱设备､显微镜设备､生物安全柜设备｡

(3)实验试剂

平板计数琼脂及生化试剂试纸由中国腹泻病控制上海试剂供应研究中心提供;显色平板及革兰染色液由上海科玛嘉微生物技术有限公司提供;沙门菌属诊断血清由兰州生物制品研究所有限责任公司提供;其他试剂按照1.2.1检测方法中各标准的要求配制｡

1.2实验操作

在对各个小项进行检验的时候需要遵照相应的国家标准进行,并保证操作的规范性｡

(1)对实验样品进行水处理｡

将实验样品从冰箱中取出之后要注意样品的温度,只有在实验样品温度恢复到室温条件的时候才能进行后续的操作｡在实验样品的温度与室温相同的时候,采用无菌开启方式将西林瓶开启,向瓶子中加入体积为4毫升的生理盐水之后在进行水化处理,直到西林瓶中的稀释液体积达到了40毫升｡待实验样品完全溶解之后,将稀释液用相应设备吸出,并将其转移到无菌瓶当中｡为了保证实验样品完全被利用,还需要使用剩余稀释液对西林瓶进行清洗,并在最后也要将清洗液倒入到无菌瓶当中｡另外,为了保证整个处理操作的质量,需要将整个操作过程对时间长度控制在20分钟以内｡

(2)菌落总数计量检测

定量量取水化处理之后的原液25毫升,向待测原液当中加入225毫升经过灭菌处理的生理盐水,在充分混合之后制成10^-1规格的稀释液｡在量取10^-1规格待测液1毫升,并向其中加入9毫升经灭菌处理的生理盐水,制成10^-2规格的稀释液,按照这种操作方式不断循环,直至制成了10^-4规格的待测液｡为了保证操作的精准性以及有效性,每进行一次稀释操作就需要更换一次无菌类型吸管｡

之后在各个稀释度样液当中各量取一毫升的稀释液,并将这些量取的稀释液放入到2个无菌类型平皿当中,同时也要做好空白对照组的制作｡还要及时的使用15毫升已经被冷却到45摄氏度条件的平板琼脂平皿,就培养皿摇匀,待到培养基完全凝固之后将其倒置于培养箱当中,将培养的温度设定为36摄氏度,在培养48小时之后进行培养基的技术操作｡

(3)大肠菌群计数检测

在对大肠菌群进行技术检测的时候采用的了最可能计数方法｡在操作中,将经过水化处理过的待测样品参照菌落总数计量检测方法要求,制备成10^-1至10^-6规格的稀释液｡向每个加工完成的稀释液当中注入3管LST肉汤,将每管稀释液当中注入的肉汤量控制为1毫升,将培养温度设定为36摄氏度,将培养时间长度设定为48小时｡如果在培养中某个稀释液出现了气体,那么就需要对相应的稀释液进行复发酵处理,并向其中接种BGLB类型肉汤,将培养液的温度设定为36摄氏度,在经过48小时的培养之后,产生气体的为大肠群阳性,同时还要记录好各个稀释度条件下BGLB产生气体的试管数量｡

(4)金葡菌检测操

准确称量25毫升经过水化处理的原液,将这部分原液加入到体积为225毫升､质量分数为百分之7.5的氯化钠和肉汤的混合液当中｡将培养的温度设定为36摄氏度,并将培养时间设备设定为20小时｡之后其转移到血平板上,将培养温度设定为36摄氏度,将培养时间设定为24小时,在此基础上挑取较为可以的菌落进行鉴定｡

(5)沙门菌检测操作

准确量取体积为25毫升的原液,向其中加入225毫升由BPW制备而成的悬浊液,将培养温度设定为36摄氏度,并将反应温度设定为18小时｡在完成了相应的培养之后,分别量取1毫升培养液并且注入到10毫升的TBB以及10毫升的SC当中,将TBB中的反应的温度设定为42摄氏度,培养时间设定为24小时;将SC中的反应温度设定36摄氏度,并将反应时间设定为48小时｡在培养完成后选择较为可以的菌落进行鉴定｡

(6)单增检测操作

准确量取体积为25毫升的原液,向其中加入225毫升由LB1制备而成的悬浊液｡将培养温度设定为30摄氏度,培养时间设定为24小时,吸取0.1毫升的悬浊液加入到10毫升的LB2当中,将环境温度设定为30摄氏度,在24小时之后,转种到PALCAM当中,设定环境温度为36摄氏度,并培养48小时,选取其中较为可疑的菌群进行鉴定｡

(7)智贺菌检测操作

准确量取体积为25毫升的原液,向其中加入225毫升由智贺菌制成的悬浊液,在环境温度为41.5摄氏度的条件下进行厌氧培养｡在20小时之后转种到XLD以及MAC当中,设定环境温度为36摄氏度,在经过24小时的培养后选取其中可疑类型的菌落进行鉴定｡

2结果

2.1菌落总数

菌落总数报告结果为1.1×105cfu/m。

2.2大肠菌群

由产气管数判断10-4~10-6为适宜的稀释度,根据其结果检索MPN表,经计算报告结果为1.5×105MPN/mL。

2.3金葡菌

Baird-Parker平板和血平板上均有可疑菌落生长,各挑取1个可疑菌落进行鉴定｡报告样品金葡菌(SA-025)中检出金葡菌(25mL中)｡

2.4沙门菌

BS平板和沙门菌属显色平板上均有可疑菌落生长,各挑取2个可疑菌落进行鉴定｡4个可疑菌落革兰染色镜检均为G-杆菌,生化反应结果均符合沙门菌属｡血清学鉴定,O抗原中A~F多价O血清凝集,O9凝集｡H抗原中Hg､Hm凝集,Hq､Hs､Ht不凝集｡生理盐水对照不凝集｡报告样品沙门菌(SAL-035)中检出肠炎沙门菌(25mL中)｡

2.5单增

PALCAM平板和李斯特菌显色平板上均有可疑菌落生长,各挑取3个可疑菌落进行鉴定｡6个可疑菌落革兰染色镜检均为G+短杆菌｡报告样品单增(LMO-038)中检出单核细胞增生李斯特菌(25mL中)｡

2.6志贺菌

XLD平板和MAC平板上均无可疑菌落生长,报告样品志贺菌(SH-043)中未检出志贺菌(25mL中)｡

3讨论

通过实验数据上的获取,可以了解到的是,参与本次试验的6项能力验证的结果在满意度上都为合格,这就说明本次实验的过程以及获得的结果都具备较强的可参考性,同时也证明了实验过程中的操作是严格按照国家标准进行的｡在开展相关项目检测时,本次能力上的验证定量项目中菌落的总数与大肠杆菌菌落的满意率分别被控制在合理的范围之内｡

技术人员开展能力验证的活动时,应对以下几个方面的内容进行重视:实验步骤开展之前对技术指导参考书进行仔细阅读,然后对样品进行准备,同时对一些预处理的部分进行整理｡针对定量项目,西林瓶中的样品是一个不能被忽略的部分,同时应作为一个实验参与整体进行对待应全部进行溶解,只取一部分进行检测的话会对检测的结果准确性产生影响｡

参考文献

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