简介：原核生物与真核生物的有关知识属高中生物教材中的基本知识点，相关考题也属常见题型，但由于本部分知识较零碎，且容易混淆而成为同学们复习时的一个难点．本文就原核细胞与真核细胞、原核生物与真核生物及相关易混淆知识作归纳总结，供同学们复习参考．

简介：真核生物与原核生物在结构和功能上既有相似，又有不同．对其掌握得好坏，直接影响相关知识的迁移与融会贯通，是同学们应当注意辨析的重点和难点之一．下面笔者就对此问题加以辨析，以帮助同学们理饵．

简介：

简介：CRISPR/CAS系统,原核生物,尤其是细菌的免疫系统,在抵抗外源性遗传物质如噬菌体病毒和外源质粒的入侵中起着一定的作用。也为其提供了后天免疫的功能,类似于哺乳动物的二次免疫。当细菌被病毒或外源性质粒入侵时,它们产生"记忆",从而抵御反复入侵。本文就CRISPR/Cas免疫方面的功能与进展进行了大致的概括。

简介：传统认为只有真核生物才有蛋白质糖基化修饰现象，虽然在原核生物细胞中发现糖蛋白的存在已经有数十年，但是没有引起我们足够的重视。最近，在细菌中发现了蛋白质的糖基化修饰系统，最具代表性的是空肠弯曲弧菌的Ⅳ-糖基化修饰系统、脑膜炎奈瑟球菌和绿脓杆菌的0-糖基化修饰系统。这些糖基化修饰系统已成功地转移到大肠杆菌中，并且独立发挥其糖基化修饰作用。寡糖转移酶在修饰过程中起关键作用，且寡糖转移酶对糖底物的特异性要求非常低，这使得按照我们的需求来“定制糖蛋白”成为可能，并标志着“原核生物糖基工程”的到来，这将为糖结合疫苗的发展提供良好的契机。

简介：目的分析巨噬细胞不同极化状态下14-3-3ηmRNA表达及其生物信息,并构建14-3-3η蛋白原核表达载体,为研究其在巨噬细胞活化中的作用提供实验基础。方法提取C57BL/6小鼠骨髓原代巨噬细胞mRNA,反转录后用实时定量聚合酶链式反应（PCR）检测14-3-3ηmRNA水平的改变。运用ProtParamtool、SOPMA等在线软件对14-3-3η氨基酸序列进行分析。以小鼠巨噬细胞cDNA为模板,采用PCR的方法扩增14-3-3η基因,插入pGEX-4T-3载体中,双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21菌株,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其原核表达并纯化,SDS-PAGE法和Westernblotting法对融合蛋白进行鉴定。采用Graphpadprism5软件进行统计分析。样本比较均采用配对t检验。结果M1型巨噬细胞14-3-3η表达降低,M2型趋势相反。生物信息学表明14-3-3η蛋白其二级结构中主要为α-螺旋（占62.60%）且疏水性较差（疏水系数为-0.607）。酶切和测序结果提示重组质粒pGEX-4T-3-14-3-3η构建成功。SDS-PAGE和Westernblotting结果表明融合蛋白谷胱甘肽-S-转移酶（GST）-14-3-3η成功表达和纯化。结论本实验对14-3-3η进行了初步的生物信息学分析,成功表达并纯化融合蛋白GST-14-3-3η,为14-3-3η在巨噬细胞极化上的功能研究奠定了实验基础。

简介：摘要在辅助生殖工作中我们经常遇到卵子没有出现双原核但有2个极体，称为零原核，这可能是由于原核出现提前或者延后而导致未能在特定的原核观察时间点进行受精情况判断。由于目前零原核来源胚胎的临床应用仍存在困惑与争议，大部分中心往往选择废弃，这在一定程度上造成胚胎浪费，从而降低卵子的利用率。近年来，零原核来源胚胎越来越受到辅助生殖技术专家们的关注并取得一定的研究进展。本文就零原核来源胚胎的发生机制、影响因素、遗传属性、发育潜能、临床结局等方面的研究进展做一综述，旨在为零原核来源胚胎的合理应用提供参考。

简介：【摘要】物种概念是一个充满争议的问题，其中至少存在24种有分歧的物种概念被不同研究方向的生物学家提出，依据其不同的物种概念，物种的界定以及物种的数量会出现很大的差异。学者们普遍认同的观点是：物种是进化分离的微居群谱系。在物种分离的过程中获得的谱系特征如生殖隔离、可鉴定性、单系统发生都可以作为鉴定其次级特征的不同方式。随着物种分析技术的发展与操作的不断改进，原核微生物物种的概念也有其自身的发展进程。

简介：目的探讨人釉原蛋白基因重组质粒PcDNA3．1-AMG的真核细胞转染表达产物是否具有促进牙周组织再生的作用。方法脂质体介导PcDNA3．1-AMG体外转染COS1细胞．ELISA法检测转染细胞内及其培养上清液中重组釉原蛋白的表达：建立犬牙周组织缺损模型．局部使用转染表达产物冻干粉．8周后通过组织学观察牙周组织再生的情况。结果PcDNA3．1-AMG转染的COS1细胞内重组釉原蛋白浓度为（0．253±0．075）μg／ml。培养液中浓度为（0．065±0．011）μg／ml；使用转染表达产物8周后．牙周缺损区牙骨质、牙槽骨均有显著再生，并且新生牙骨质为有胶原纤维穿通的无细胞牙骨质。结论重组质粒PcDNA3．1－AMG在体外转染哺乳动物细胞后能够表达重组人釉原蛋白．并且表达产物具有促进牙周组织再生的生物学活性。

简介：目的探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性。方法首先,比较了两种流行的商业化载体：开放式拉长麦管（openpulledstraw,OPS）和冷冻帽（cryotop）开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果。其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体（cryotip）开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存。之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析。结果OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性（P〉0.05）,但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性（P〉0.05）,数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组。结论OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的。

简介：真核生物的基因表达需要经历染色质结构活化、DNA复制、转录起始及转录、翻译及翻译后加工等过程，这些过程同时也成为基因表达的调控点。本文在染色质、DNA、RNA三个层面阐述了真核生物基因表达调控的特点，以及其在基因水平防治肾脏疾病方面的意义。

简介：紫外线B(UV-B)对于植物生长发育具有重要调节作用,其中UVRESISTANCELOCUS8蛋白作为UV-B的光受体在植物响应UV-B过程中起关键作用。草莓是一种重要的经济果树,目前关于草莓的UV-B光受体报道较少。为研究草莓中UV-B受体蛋白,本研究采用同源克隆的方法获得‘丰香’草莓中编码UV-B光受体蛋白的cDNA序列,进行了生物信息学的分析并构建了原核生物表达载体pET32a-UVR8,利用中心点响应面法优化了重组蛋白的诱导条件(包括诱导温度,IPTG浓度,菌液浓度和诱导时间)。结果表明:克隆得到了编码草莓UVR8蛋白的全长cDNA序列,命名为FaUVR8,生物信息学分析表明该序列长1317bp,编码438个氨基酸,预测分子量为47.28kD,等电点pI为5.85,重建蛋白质三维结构表明该蛋白包含7个β-片状螺旋结构;原核表达得到69.7kD的融合蛋白,对四个诱导条件优化表明将工程菌培养至菌液OD600=0.7,加入浓度为0.55mmol/L的IPTG,在27.72℃下诱导9h,可获得最大量重组蛋白79μg/mL。研究结果可为后期寻找与FaUVR8蛋白互作的下游蛋白,以及进一步开展其功能研究提供参考。

简介：目的：SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白（TAT）蛋白转导域（PTD）的TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法：将TATPTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a（＋）中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2＋-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系（HPMC）,通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果：用基因工程方法表达和纯化了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2＋-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%（HPLC归一法）;功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论：表达了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。

简介：为了探索梨树植物的开花调控机制,本研究以砂梨（PyruspyrifoliaNakai）叶片为材料,采用同源序列克隆法,进行了开花调控相关基因CONSTANS的克隆,命名为PyCO,GenBank登录号为KF246572。序列分析表明,该基因包含一个1023bp的开放阅读框,编码340个氨基酸,推测蛋白质分子量为37.81kD,等电点为5.95。PyCO蛋白具有典型的植物CO家族的结构特征,含有2个高度保守的B-box及CCT结构域。进化树分析表明,该氨基酸序列与苹果的同源性接近93%,与碧桃、可可树、草莓等其他高等植物的CO类蛋白同源性也在70%以上。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白,分子量约为58.5kD,为进一步探索梨树开花调控机理奠定了基础。

简介：

简介：人工合成AalT的成熟基因，连接到pET32载体并转化大肠杆菌，IPTG诱导表达，纯化重组AalT蛋白并免疫小鼠，经蛋白质一G柱对抗血清进行纯化．研究结果表明，纯化得到了AalT蛋白经免疫小鼠和纯化抗血清得到了特异性强的AalT抗体蛋白．

简介：摘要： 目的 获得人载脂蛋白 A-I (apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法 研究由诱导温度、 IPTG终浓度、 IPTG诱导时间等对 apoA-I重组蛋白表达量的影响。 结果 SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为 29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为 32℃、 IPTG诱导浓度为 1.0mmol/L以及 IPTG诱导时间为 3h。结论 成功在大肠杆菌中诱导表达出来 apoA-I，并筛选出 apoA-I原核表达的最优条件。

简介：摘要目的获得人载脂蛋白A-I(apoA-I)重组蛋白原核表达的最佳条件。方法研究由诱导温度、IPTG终浓度、IPTG诱导时间等对apoA-I重组蛋白表达量的影响。结果SDS-PAGE验证各不同条件下获得目的蛋白条带为29kd;结果显示重组大肠杆菌菌株的最佳条件为32℃、IPTG诱导浓度为1.0mmol/L以及IPTG诱导时间为3h。结论成功在大肠杆菌中诱导表达出来apoA-I，并筛选出apoA-I原核表达的最优条件。

简介：为了进一步明确苹果茎痘病毒（Applestempittingvirus,ASPV）的分子变异及株系分化,制备相应特异性抗血清。本研究以库尔勒地区种植的感染ASPV的鸭梨（Y）枝条韧皮部为试材,采用RT-PCR技术扩增ASPVCP基因,克隆、测序,获得了鸭梨分离物外壳蛋白（ASVPCP-Y）基因,将该CP基因连接到表达载体PET-28a上,转化到大肠杆菌BL21（DE3）,1mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析。研究结果表明,获得的鸭梨ASPVCP基因全长1194bp,推测编码397个氨基酸,与已报道的ASPV分离物的氨基酸序列同源性为70%左右。进化分析结果显示,ASPVCP基因的分离物可聚为三个类群：第一类群的寄主为苹果,第二类群的寄主为梨（除了NC_003462,苹果）,ASPVCP-Y归入第三类群。CP基因在大肠杆菌中诱导表达,其融合蛋白分子量约为42kD。克隆的鸭梨ASPVCP基因及构建的原核表达载体为制备ASPV重组CP基因多克隆抗体及ASPV的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

简介：摘要目的克隆编码人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组原核表达质粒,为进一步研究其功能提供依据。方法PCR扩增人GM-CSF基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体PET32a+获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,PCR和Western-blot鉴定表达产物。结果重组质粒经PCR、限制性内切酶及DNA测序证实构建成功;且诱导后能在大肠杆菌中稳定表达PET-GMCSF嵌合蛋白。结论成功构建并表达了PET-GMCSF蛋白,为进一步研究GM-CSF功能奠定基础。