简介:摘要:目的:建立大肠杆菌表达的重组蛋白外源性E.coli宿主残留DNA的检测方法用于生产过程以及最终产品的质量控制。方法:参考试剂盒相关说明书,样品加标回收了率无法达到2020版中国药典(Ch.P)第四部3407章节和美国药典(USP)1130章节的要求,通过对药物浓度、处理温度、糖原的蛋白酶K的使用量以及不同的加标量的优化,即将样品稀释10倍后,加30pg的E.coli标准品,20μl的蛋白酶K消化1h,选择15μl PCR反应体系。结果:回收率满足在50%~150%之间。结论:借助商品化的试剂盒,优化的外源性DNA提取条件满足法规要求、操作简便,非常适用于大肠杆菌表达的重组蛋白生产过程以及最终产品的外源性残留DNA的检测。
简介:摘要:肉鸡大肠杆菌病是由致病菌大肠杆菌引起的一种疾病,其致病因素与养殖环境密切相关,对养禽业造成极大危害。致病性大肠杆菌有多种血清型,在临床实践中,大肠杆菌有许多血清型,不同血清型的致病性差异很大。鸡肠炎大肠杆菌病容易在全年发生,任何年龄的鸡都可以感染,不同年龄的鸡感染大肠杆菌的实际临床症状差异较大,容易在鸡群中广泛传播,病死率高,鸡群一旦发病很难完全控制。大肠杆菌可引起大肠杆菌败血症、肠炎、脐带心肌炎、心包炎、蛋黄腹膜炎、关节炎和肉芽肿等病症。在饲养鸡只的各个环节,饲养者需要掌握相关专业知识和技术,充分了解肉鸡大肠杆菌病的发病因素和临床症状,及时准确地诊断疾病,采取有效的方法预防和治疗肉鸡大肠杆菌病,同时需要避免滥用药物,以免造成大肠杆菌的耐药性。
简介:目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY)。方法:选取含pET28a(+)-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中,控制溶氧为30%~50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6h;收集菌体,纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性。结果:发酵液中最终菌体密度达80g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论:用含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件。
简介:鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的禽类急性或慢性细菌性传染病,不同品种和不同Et龄的鸡均可感染,幼雏和中年鸡对此病最易感染,且一年四季均可发生。但以冬、春季节较为多见。如果养殖密度过大、饲养笼具及环境消毒不彻底、场地环境污染严重,则该病随时均可发生。大肠杆菌是革兰氏阴性菌,是存在于人或动物肠道的常在菌,鸡群可能由于环境变化发生应激或患病后免疫力下降诱发此病,如,日常饮食污染的水源和垫料,或经呼吸道、消化道、蛋壳穿透、交配、污染的输精管等感染都可诱发。临床症状及病理变化:发病鸡离群呆立、羽毛粗乱、消瘦,侵害呼吸道后出现呼吸困难;侵害眼睛后会出现眼前房肿胀;也可侵害关节,可造成关节炎和滑膜炎,排黄绿色稀粪。出现纤维素性的心包炎和肝周炎,胸腔和腹腔内膜浑浊,有炎症,肠壁膜增厚,外观呈深红色。同时,鸡群会出现呼吸困难,发出哕音等。雏鸡大多出现肚子肿胀与脐炎,卵黄膜增厚,呈黄绿色,卵黄吸收不良,生长发育受阻,有的可能出现脑炎。产蛋鸡主要以出现坠卵性腹膜炎及输卵管炎,造成输卵管扩张,内有干酪样团块及恶臭的渗出物为特征。
简介:鸡、火鸡、鸭、鹅等禽类都可感染,雏鸡易发,死亡率也高。饲养管理不善,往往引起该病发生.常与某些病并发或继发。积聚在肠道的大肠杆菌可引起肠管充血.细菌产生的毒索破坏肠壁,进入血液.造成一系列的感染。粪便污染是主要的传播方式.大肠杆菌随粪便排出,粪便干燥后随尘土飘散在空气中,通过呼吸道侵入健康禽体;被病禽粪便污染的饲料、用具等也可以成为导致该病的发生重要因素;禽蛋污染也是一个传播方式.禽蛋通过泄殖腔时,被含有致病性大肠杆菌的肠道分泌物污染.蛋在窝里停留也可以污染.病原体可以进入蛋内.降低孵化率和雏禽的质量。鸭蹼刺伤常使鸭群感染。该病一年四季均可发生。