简介:摘要为探讨聚合酶链反应(PCR)DNA扩增对诊断活动性肺结核的临床价值,本文用PCR技术扩增结核杆菌特有的MPB64蛋白基因序列,对121例病人临床标本进行检测,发现34例活动性肺结核中有28例PCR阳性,疑诊为肺结核者33例中有18例阳性,非结核肺疾患54例中有10例阳性,其中有肺结核既往史者阳性6例,有结核接触史者阳性3例。提示PCR阳性并非为活动性肺结核所特有。
简介:目的建立针对脆性X综合征FMR1基因CGG重复数的快速产前检测技术方法,用于基于人群的筛查。方法采用荧光PCR法对356名孕妇进行产前FMR1基因CGG重复数检测。结果本方法可检测CGG重复数小于130的携带者,共275例(77.25%)毛细管电泳结果显示为2组峰,提示为杂合型基因型,可明确诊断。81例(22.75%)仅见到一组峰,提示可能为纯合子,也可能为CGG重复数高于130的携带者。结论基于荧光PCR的检测技术,临床上可实现近80%孕妇FMR1基因CGG重复数精确、快速的初筛,剩余病例的明确诊断尚需其他技术辅助。
简介:目的:从海参体壁组织中分离提取蛋白酶体,研究其酶学性质。方法:新鲜海参组织经匀浆、Tris-HCl缓冲液浸提后得到粗提物,再经(NH4)2SO4盐析、二乙氨乙基葡聚糖纤维素和丙烯葡聚糖凝胶S-300分离纯化后得到海参蛋白酶体。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量200ku。结果:海参蛋白酶体特异性最强的检测底物Boc-GAA-MCA,最适pH8.0,最适反应温度45℃。40℃时蛋白酶体活性稳定,在1h的孵育过程中呈现一定的热激活效应。在50~60℃,酶活力随孵育时间的延长迅速下降。K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+均可明显抑制其活性。抗痛素、N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基化酮、N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮及E-64均可显著抑制该蛋白酶体活性。结论:海参体壁蛋白酶体具有典型的蛋白酶体的复合型活性,其中胰蛋白酶样活性较强,之后是糜蛋白酶样活性,而肽基谷氨酰肽水解酶样活性最弱。
简介:[目的]研究在卒中易感型自发性高血压大鼠(stroke-pronespontaneouslyhypertensiverat,SHR-SP)肾脏中,基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases,MMPs)-2,-9以及组织型基质金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitorsofmatrixmetalloproteinases,TIMPs)-1,-2的表达与活性的变化.[方法]分别采用40只7周龄雄性SHR-SP大鼠及10只同周龄雄性Wistar-Kyoto大鼠作为高血压组与阴性对照组.观察期间定期测量各组大鼠无创鼠尾压.6个月后,处死存活大鼠留取血液及肾脏标本,测定血清肌酐及尿素氮浓度,采用组织病理染色观察两组大鼠肾脏组织学改变,采用明胶酶谱法分析存活大鼠肾脏MMP-2和MMP-9蛋白活性,并采用逆明胶酶谱法及蛋白质印迹分析TIMP-1和TIMP-2蛋白表达和活性.[结果](1)明胶酶谱分析显示:SHR-SP肾脏中MMP-2活性较WKY组明显增高[(3.28±1.17)vs.(1.26±0.62);P<0.01].(2)逆明胶酶谱分析显示:高血压大鼠肾脏TIMP-2的活性明显高于WKY组[(1.12±0.43)vs.(0.78±0.34),P<0.05].(3)蛋白质印迹结果显示:高血压组大鼠肾脏TIMP-1、TIMP-2表达较对照组高[(TIMP-1:(3.44±0.13)vs.(2.31±0.15),TIMP-2:(6.44±0.49)vs.(4.94±0.68),P<0.01].[结论]SHR-SP肾脏组织中MMP-2及TIMP-2的活性增高,TIMP-1及TIMP-2的表达均明显升高.
简介:目的:构建含解耦联蛋白2(UCP2)-3’非翻译区(UTR)序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体.探讨微小RNA(miR)-15b对UCP2基因表达的调控作用。方法:应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因,分别将预测靶基因UCP2的3’UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体DsiCHECK-2骨架中,构建UCP2野生型和突变型质粒。并采用测序方法鉴定DsiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功。将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染。通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用。结果:测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降.下调31%(P=0.003),过表达miR-15b抑制剂后,UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加,上调46%(P=0.01)。而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响(P〉0.05)。结论:UCP2是miR-15b直接作用的靶基因,且miR-15b结合于UCP2基因3’UTR区域.转录后水平对UCP2有直接的抑制作用。
简介:摘要目的探讨尿蛋白结合尿酶(NAG)检测在早期药源性肾损害临床诊断中的意义。方法收集近年来在我院检验科进行尿蛋白和尿酶(NAG)测定的89例临床资料,其中发生药源性肾损害的46例为A组,健康体检者43例为正常对照B组。尿蛋白检测采用干化法,尿酶(NAG)检测采用终点比色法。结果肾损害A组中尿白蛋白检出阳性率71.7%,尿酶(NAG)检出阳性率78.3%,两项指标联合检测中至少有一项及以上阳性的检出阳性率91.3%,肾损害A组阳性检出率远高于健康对照B组(P<0.01)。结论尿蛋白检测简单、实用,尿酶(NAG)检测可靠性高,二者结合对于诊断早期药源性肾损害非常有价值。
简介:目的研究低氧状态下乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynu—cleotide,AS—ODN)对胰腺癌高转移细胞株MIAPaCa-2细胞基质金属蛋白酶.2(matrixmetalloproteinase.2,MMP-2)和MMP-9的影响。方法以HpaAS—ODN预先阻断MIAPaCa-2细胞Hpa表达并低氧培养,观察MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白表达的变化,明胶酶法检测MMP-2和MMP-9活性的变化,观察阻断Hpa对MMP-2和MMP-9表达及活性的影响。结果低氧培养条件下,MIAPaCa-2细胞MMP-2mRNA及蛋白表达略有上调,但是与常氧条件下培养对比,在6、12和24h差异均无统计学意义(P值均〉0.05)。以ASODN阻断Hpa后,MMP-2mRNA及蛋白表达均无明显变化。低氧后6hMMP-9mRNA及蛋白表达开始升高,12h(P〈0.05)和24h(P〈0.01)更加明显。阻断Hpa表达后,MMP-9mRNA及蛋白表达在各时间段均有下降,而在24h下降明显,差异具有统计学意义(P〈0.01)。低氧后12h和24h,活化型的MMP-2和MMP-9均显著增强,当Hpa表达被抑制后,于12h(P〈0.01)和24h(P〈0.01)活化型的MMP-9活性受到明显抑制,而各时间内,活化型的MMP-2活性均不受HpaAS—ODN的影响(P〉0.05)。结论低氧可刺激MIAPaCa-2细胞MMP-9mRNA及蛋白的表达,增强酶活性。预先阻断Hpa表达在12h和24h可抑制MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低MMP-9的活性,而对MMP-2则无明显影响。
简介:摘要目的探究尿微量蛋白与尿酶检测在急性肾炎恢复期的意义。方法对在2013年6月到2013年11月期间在我院进行急性肾炎患者210例,其中有89例在调查时处于恢复期为研究组,完全康复患者进行复查的71例为对照组,对两组患者的尿微量白蛋白mALB和NAG酶进行测定,并对其值分析。结果对照组患者的mALB检测值和NAG酶(尿酶)的检测值进行比较,研究组患者的检测值高于对照组,且有差异(P<0.05),研究组患者的检测值的阳性率分别是mALB41%,NAG32%,NAG酶与mALB联合检测阳性率为48.7%。结论尿微量蛋白和尿酶的联合检测可以敏感地诊断急性肾炎恢复期肾脏损害,给临床准确评价治疗效果,预测其预后。即尿微量蛋白联合尿酶检测诊断肾脏疾病具有较高的价值,值得临床上广泛应用。
简介:摘要目的对在乳腺癌中膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)蛋白表达的临床意义进行评价分析。方法随机抽取我院收治的乳腺癌临床患者病例58例作为研究对象,对其采取免疫组化法展开膜型基质金属蛋白酶-1蛋白检测,并回顾分析检测结果。结果本组58例患者中,膜型基质金属蛋白酶-1蛋白表达阳性者32例,阳性率为55.17%。且不同临床分期阳性率差异显著(P<0.05)。结论MT1-MMP的表达率同乳腺癌肿瘤分期、大小以及淋巴结转移之间存在明显的关系,值得关注。
简介:摘要目的研究基质金属蛋白酶抑制基因RECK在子宫内膜癌组织中和正常子宫内膜中如何表达及其意义。方法选取沈阳市妇婴医院2009年1月~2012年12月41例子宫内膜癌患者行广泛子宫切除术的标本石蜡切片和同期20例子宫脱垂患者手术切除的正常子宫内膜标本石蜡切片,对组织RECK采用免疫组织化学法检测。结果1、RECK表达在细胞膜表达,内膜癌组织中RECK阳性表达率为53.6%;对照组RECK阳性表达率为80%,差别有显著性意义(P<0.05)。2、Ⅰ期的子宫内膜癌组织中RECK的表达阳性率明显高Ⅲ期(P<0.05),Ⅱ期与Ⅰ期比较无显著性差异(P>0.05)。Ⅱ期与Ⅲ差别有显著性差异(P<0.05);子宫浅肌层浸润者RECK表达阳性率高于深肌层浸润者(P<0.05);子宫内膜癌病理分级间RECK表达差别无显著性意义;RECK在有淋巴转移和无淋巴转移组间比较差别有显著性意义(P<0.05)。结论1、RECK在正常子宫内膜中广泛表达,在子宫内膜癌组织中表达明显降低或不表达。2、RECK可抑制子宫内膜癌的发生、浸润和转移。