简介：目的：通过在大肠杆菌中分段表达禽流感病毒聚合酶酸性蛋白（PA蛋白）,探索PA基因中可能影响表达的区域。方法：构建分段缺失的PA蛋白突变体,用IPTG在大肠杆菌RosettaGamiB（DE3）中诱导表达,比较各突变体的表达效率。结果：N端缺失长度在143～408个氨基酸残基之间的9个突变体在大肠杆菌中的表达水平较高;而突变体PA/K（Δ1-40aa）、PA/M（Δ1-56aa）、PA/N（Δ41-56aa）和PA/P（Δ57-75aa）的表达水平很低;全长PA蛋白和缺失N端20个氨基酸残基的突变体PA/L则检测不到表达。结论：PA基因的61～225bp和325～426bp可能是影响PA蛋白表达的2个重要区域,为下一步表达全长PA蛋白奠定了基础。

简介：聚合酶链式反应（PCR）技术的问世和发展是分子生物学研究领域中最重要的进步之一.在PCR技术中,DNA聚合酶起着至关重要的作用,从某种意义上说,DNA聚合酶的研究进展决定着PCR技术的发展趋势和应用范围,研究者们一直在努力探寻着酶学性能好、保真度高的PCR用DNA聚合酶.高中生物人教版选修1和选修3都对PCR技术的原理和过程作了详尽的介绍,但对热稳定DNA聚合酶的描述极少,仅仅提及Taq酶.因此,有必要对PCR用DNA聚合酶的基本类型和特点进行分析归纳.

简介：

简介：摘要乙型肝炎病毒（HBV）是导致肝炎、肝硬化等肝脏疾病的重要病原体。HBV前基因组RNA（pgRNA）在其生命周期中发挥着重要作用，它既是翻译病毒核心蛋白和聚合酶蛋白（polymerase，P）的信使RNA，也是病毒进行逆转录的模板。作为HBV的重要结构蛋白，P蛋白和core蛋白的比例在HBV复制中受到严格调控。由于二者均由pgRNA翻译产生，且P蛋白的开放阅读框（ORF）位于核心蛋白ORF的下游，P蛋白的翻译如何启动是一个十分关键的科学问题。既往研究认为，P蛋白可能通过泄露扫描、翻译再起始等机制来启动翻译。本文通过文献阅读与推演，对HBV pgRNA选择性翻译P蛋白的机制进展进行综述，并尝试总结了起始P蛋白翻译的可能机制。

简介：摘要重组酶聚合酶扩增（RPA）技术是一种新型核酸恒温扩增检测技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测。本文从RPA技术的基础理论和实验要点出发概述了开展该项研究需要注意的要点，综述了RPA技术在医学检验领域的应用现状和相关问题，并展望了其未来发展的广泛前景。

简介：摘要目的原核表达GII.P16型诺如病毒RNA依赖RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）蛋白，并对其进行生物活性测定和晶体制备。方法首先通过RT-PCR方法获得GII.P16 RdRp完整基因并将其克隆至携带His-Tag PET28a载体，构建重组表达质粒，然后转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，并用IPTG诱导RdRp的表达，最后利用SDS-PAGE和Western blot的方法鉴定蛋白的表达情况；采用His-Tag亲和层析和分子筛的方法纯化目的蛋白；分别使用体外酶催化实验和Hampton结晶试剂盒进行蛋白活性测定和晶体筛选。结果构建了原核表达重组体PET28a-RdRp，并大量表达了相对分子质量约60 kDa的可溶性蛋白；经两次纯化后，获得了高纯度的目的蛋白，纯度达到90%以上；体外酶催化实验显示RdRp重组蛋白具有良好的生物活性；通过多种生长条件的筛选，获得了优质的RdRp晶体。结论本研究成功获得的GII.P16 RdRp蛋白及其晶体，为理解其生物学功能和解析其晶体结构奠定了基础。

简介：摘要目的对聚合酶链反应（FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒进行分析，了解其临床应用价值。方法用中山医科大学达安基因诊断中心设计的HBV-FQ-PCR试剂盒对101份临床血清标本同时进行PCR荧光定量和ELISA肝炎标志物检测，对检测结果进行分析。结果经过FQ-PCR检测，24份HbsAgHbeAgHbcAb都阳性的标本，其血清HBV-DNA也全部阳性，HBV-DNA拷贝数范围在1.4×105-7.0×109/ml之间；32份HbsAgHbeAbHbcAb都阳性的标本，阳性率为46.9%，HBV-DNA拷贝数范围在0-8.1×107/ml之间；14份HbsAb阳性的标本，阳性率为7.1%，HBV-DNA拷贝数范围在0-5.0×104/ml之间；18份全阴性的标本，阳性率为5.6%,HBV-DNA拷贝数范围在0-4.9×105/ml之间。结论FQ-PCR定量检测HBV-DNA灵敏度，特异性较高，能基本反映乙肝病毒在体内的真实复制情况，具有较高的临床应用价值。

简介：目的建立食品中沙门菌聚合酶链反应（PCR）的快速检测方法。方法根据沙门菌invA基因序列设计引物；氯化镁孔雀绿选择性增菌0到8h后，煮沸法提取DNA，用PCR扩增电泳。结果PCR法能特异性检测出食品中的沙门菌，扩增片段为389bp，增菌前的检出限为10^2CFU／g，增菌后为2CFU／25g。结论应用PCR检测沙门菌具有快速、特异、灵敏和简便的特点。

简介：摘要目的在pMDT-18克隆质粒载体的基础上，构建实用型的能够稳定转染甲型流感病毒RNPs并且可体外定量检测的RNA聚合酶I荧光报告系统。方法设计并人工合成人RNA聚合酶I启动子、小鼠终止子序列及毒株A/Puerto Rico/8/34的NP基因的UTR，利用嵌合PCR方法将绿色荧光蛋白（eGFP）基因与上述元件体外连接，形成小鼠终止子-3’UTR-eGFP-5’UTR-人RNA聚合酶I启动子报告元件，将报告元件克隆至不携带任何启动子的pMDT-18质粒载体中，构建实用型RNA聚合酶I荧光报告质粒，转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞，观察荧光表达及测定相对荧光度。结果该系统在转染HeLa细胞后，无任何荧光产生，而转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞后24 h、36 h、48 h和60 h均有荧光产生，强度随时间逐渐增强。结论成功构建了实用型RNA聚合酶I荧光报告系统，有助于提高流感病毒反向遗传系统的拯救效率、研究流感病毒聚合酶功能以及探索UTR多态性对特定基因的复制或转录的影响机制，为流感工作者在病毒分子机制领域的研究搭建了可靠的技术平台。

简介：摘要聚合酶链反应(PCR)是一种在试管进行的简便而快速的特异性DNA体外扩增技术，其基本原理与细胞内DNA复制的相似，但反应体系相对比较简单。主要应用于传统培养方法不能及时准确检出或敏感性太低或培养时间长的病原体的检测。PCR扩增能力极强、灵敏性极高，微量的样品污染便有可能导致假阳性结果的出现，为此，在实验操作中应谨防污染的发生，并设置严格的对照，以提高PCR结果的正确性。

简介：在本文中主要针对医学检验中聚合酶链反应的应用和进展做出了深入的探讨与分析，聚合酶链技术具有精准度高、操作方便等特点，在医学检验领域中得到广泛应用，文中主要从医学检验的不同的领域研究聚合酶链反应的具体应用，并且提出聚合酶链反应在医学检验中的具体要求，以此来进一步对医学检验中聚合酶链反应的应用进行优化，推动本次研究发展的同时，为相关工作人员提供良好的参考依据。

简介：目的：筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本，以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照，用聚合酶链反应-酶联免疫法（PCR-ELISA）对已报道的5个孢子丝菌特异性探针（U26852、U26866、U26866′、M85053及AF117945）进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数（EI）值。结果PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上；在相同的ELISA条件下，探针U26852显色最强，EI值最高。结论针对28SrRNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。

简介：目的研究聚合酶链反应分析急性视网膜坏死综合征眼内液病毒DNA的临床价值.方法聚合酶链反应检测28例37个眼内液标本疱疹病毒DNA,分析检测结果、影响因素及最终诊断.结果发现水痘-带状疱疹病毒DNA15例,单纯疱疹病毒1型DNA3例.适宜检测时间为炎症活动期,不用或短期使用抗病毒药.前房水和玻璃体均可取得可靠结果.结论聚合酶链反应检测眼内液病毒DNA,方法简便,尤其有助于疑难病例的诊断.

简介：摘要聚合酶链反应技术操作简便且灵敏程度较高，具有良好的特异性，是研究、检测以及鉴定标本中DNA片段的一种重要方式，在医学检验中具有较好的应用价值。本文就聚合酶链反应技术在医学检验中的实际应用情况进行分析，并对其未来发展进行展望，仅供相关人员参考。

简介：摘要目的分析聚合酶链对肝硬化患者腹水细菌DNA的检测效果。方法选择细菌通用引物，引入到16SrRNA基因保守区，本次研究中，选择48例腹水样本，对样本行PCR扩增处理和阳性阴性对照实验。分析实验结果。结果在分析48例标本时，在15例标本中获得了370bpDNA片段，进过检测，阳性率为31.25%。而阴性和空白对照标本则并未体现出特异性。在PCR扩增后，可以检测出10pgDNA。结论在肝硬化腹水患者的检测中，采用聚合酶链技术，可以达到特异性和敏感性的需求，便于检测患者的细菌情况，具有较高的临床诊断价值。

简介：人类巨细胞病毒(HCMV)在成年人群中感染很普遍，且随年龄增长，感染率明显增高。但多数呈不显性感染或潜伏感染，损伤机体的免疫功能。HCMV的先天性感染或围产期感染常常危害胎儿和新生儿，因此早期准确诊断HCMV感染对指导防治，促进优生优育工作有重要的意义。笔者采用聚合酶链反应(PCR)技术检测HCMV，现报告如下。

简介：肺炎支原体（ＭＰ）是人类呼吸道感染的重要病原体。本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术自１９９６年１月—１９９８年１月检测呼吸道感染的住院和门诊患儿５９１例，其中肺炎支原体ＤＮＡ阳性确诊肺炎支原体感染６６例，现报告如下。１对象与方法１．１对象５９１例呼吸道...

简介：为探讨阜阳地区庚型肝炎病毒感染的现状，采用逆转录-Nested-聚合酶链反应技术检测HGVRNA。结果在献血员和各类患者中HGVRNA检出率分别是：献血员8.8%，血透患者15.4%，慢性乙型肝炎6.5%，慢性丙型肝炎17.8%，非A-E型肝炎14.2%，提示：HGV感染多为无症状携带者或亚临床型，常与HCV重叠感染并与输血密切相关。

简介：

简介：摘要DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。随着科学技术以及经济的发展，微生物的检验准确性在临床和生活健康以及饮食上都有着不可忽视的作用。本研究主要通过对聚合酶链式反应进行介绍，针对其特点深入研究其在微生物检验中的应用。