简介:目的:制备用于特异性分离阪崎肠杆菌的免疫磁性壳聚糖微球以及对阪崎肠杆菌的捕获效果。方法:采用反向悬浮交联法制备磁性壳聚糖微球.并对微球的表面进行氨基化修饰。然后与阪崎肠杆菌多克隆抗体进行偶联,制备免疫磁性壳聚糖微球。优化磁性壳聚糖微球对阪崎肠杆菌多克隆抗体的偶联条件,包括偶联时间、磁性壳聚糖微球用量、偶联体系pH,对抗体的饱和偶联量。通过与显色培养基结合的方法研究免疫磁性壳聚糖微球对阪崎肠杆菌的捕获能力。结果:制备的磁性壳聚糖微球通过表面修饰能连接上大量的活性氨基。在pH7.4的偶联体系中,10.0min即可完成对阪崎肠杆菌多克隆抗体的偶联,0.01g磁性壳聚糖微球对抗体的饱和偶联量为25~50μL。当阪崎肠杆菌浓度较低时,制备的免疫磁性壳聚糖微球对阪崎肠杆菌的捕获率达94.7%,对阪崎肠杆菌的灵敏度为5cfu/mL。结论:获得阪崎肠杆菌免疫磁性壳聚糖微球,该微球是一种非常有潜力的快速富集、分离阪崎肠杆菌的有效方法。
简介:建立免疫磁珠分离(ImmunomagneticSeparation,简称“IMS”)联合荧光定量聚合酶链式反应PCR(PolymeraseChainReaction,简称“PCR”)快速检测阪崎肠杆菌的方法。制备以生物素介导偶联的链霉亲和素免疫磁珠,优化偶联和捕获条件。合成阪崎肠杆菌ITS(InternalTranscribedSpacer简称“ITS”)靶基因序列的引物和探针,同时构建内参质粒(InternalAmplificationControl,简称“IAC”),建立能够实时监控反应过程的荧光定量PCR反应体系。在1mL体系中添加粒径为80nm的链霉亲和素免疫磁珠0.3mg,孵育30min,可获得80.5%以上的捕获效率。建立的基于内参的荧光PCR体系针对质粒检测时,Ct值(Cyclethreshold,简称“Ct值”)与模板拷贝数有着良好的线性关系(R2=0.998),IMS-PCR检测体系对阪崎肠杆菌菌液的检测灵敏度为33.3CFU/mL,可在3h内完成。针对4株阪崎肠杆菌标准菌株和5株非阪崎肠杆菌菌株的检测也显示出较好的特异性和稳定性,人工模拟样品的检测结果与采用国标法检测的结果完全一致,可用于快速检测样品中的阪崎肠杆菌和疾病预防。
简介:摘要目的提高营养米粉类食品中阪畸肠杆菌的检出率。方法对同一份营养米粉类样品,用两种方法进行前增菌,一种方法是现行有效的国家标准GB4789.40—2010,另一种方法是在取检样相同的情况下,比GB4789.40—2010所规定的BPW稀释液多4倍进行前增菌,目的是确保增菌液的液体状态,相同时间相同温度前增菌后,再用同样的方法进行mLST—Vm增菌,再接种阪畸肠杆菌显色培养基,转种TSA平板进行色素试验,再进一步生化鉴定。综合菌落形态和生化特征,判断是否阪畸肠杆菌。结果用两种前增菌方法对97份婴幼儿配方食品类的营养米粉进行前增菌培养,按国家标准GB4789.40—2010所规定的前增菌方法的阪畸肠杆菌的检出率是8.25%(8/97)。另一种前增菌方法的检出率是14.43%(14/97),两种增菌方法的差异有统计学意义(P﹤0.05)并且国家标准GB4789—2010所规定的前增菌方法未检出阪畸肠杆菌的,通过增加前增菌液BPW后,能检出阪畸肠菌杆。结论在取样品量不变的前提下,对吸水性较强的检样,增加前增菌液BPW后,能提高阪畸肠杆菌的检出率。
简介:摘要目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株在我院的分离率和耐药率,以利于对产ESBLs菌株的监控,同时指导临床合理用药。方法用法国生物梅里埃ATB-Expression自动微生物鉴定分析仪做细菌鉴定及药物敏感试验,对仪器提示为产ESBLs的菌株,用双纸片协同法进行ESBLs的确证试验。结果我院2013全年共检出大肠埃希菌313株,其中产ESBLs202株,占64.9%;检出肺炎克雷伯菌286株,产ESBLs110株,占38.5%;检出变形杆菌46株,其中产ESBLs20株,占43.4%。根据药敏试验结果显示,产酶株比非产酶株的耐药率高。结论随着广谱抗菌药物广泛应用于临床,产ESBLs菌株越来越多,产酶株比非产酶株的耐药性明显增强,且呈现有多重耐药菌株,可供选用的药物减少,给临床诊治带来巨大挑战。因此,各实验室对革兰氏阴性杆菌ESBLs检测显得更加重要,及时正确报告产ESBLs菌株,对指导临床合理用药,延缓细菌耐药性产生,抑制耐药菌株的播散具有重要意义。
简介:实蝇与体内微生物的共生关系是目前较受关注的研究课题.其中,肠杆菌科细菌是这些内共生微生物中的重要一类,广泛存在于实蝇肠道和生殖系统中.研究证明,共生肠杆菌科细菌在参与实蝇的碳氮循环、营养代谢、生殖免疫及生物防治等方面都发挥着极大的作用.近年来,人们利用分子生物学技术已鉴定出部分实蝇内共生肠杆菌科细菌的类群,发现许多优势的益生肠杆菌种和代谢产物,它们能增强实蝇的健康,提高昆虫不育技术的应用高效性.本文对实蝇共生肠杆菌科细菌的种类、分布和作用,以及它们在不育昆虫技术中的应用进展作一综述,这不仅有助于人们更深入地了解宿主与共生菌群落间的互作关系,而且对人类开发新型实蝇防治饵剂以及将此类共生益生菌应用于实蝇不育技术有重要意义.
简介:摘要目的探讨肠杆菌科细菌的培养及耐药性,为临床提供合理用药方案。方法分析肠杆菌科细菌87份标本的细菌培养及耐药性,细菌鉴定按常规方法培养分离鉴定,药物敏感试验应用M-H培养基,以K-B纸片法进行11种抗菌药物的监测。结果判读按美国临床实验室标准化委员(NCCLS)制定指南进行试验质量控制。结果培养结果大肠埃希氏菌41株,肺炎克雷伯肺炎亚种22株,产酸克雷伯菌11株,阴沟杆菌7株,其它6株。对氨苄西林(AMP)的耐药率几乎100%,对四代头孢菌素头孢吡肟(FEP)的耐药率竟也高达40%左右,对头孢唑啉(CFZ)、西力欣(CFX)、头孢噻肟(CTX)的耐药率均大于50%,产酸克雷伯菌对头孢唑啉(CFZ)和氨曲南(ATM)的耐药率高达80%以上。结论肠杆菌科细菌的耐药性越来越严重,临床用药要严格根据药敏试验结果,不要盲目滥用抗生素。监测肠杆菌科细菌的耐药性,为临床用药提供可靠依据。
简介:目的:了解超广谱β-内酰胺酶在肠杆菌科中流行情况;方法:用纸片扩散确证法对临床送检各类标本分离的456株肠杆菌科细菌进行超广谱β-内酰胺酶检测;结果:456株肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶91株,检出率为19.96%。肠杆菌属、克雷伯氏菌属ESBLs流行较严重,其中阴沟肠杆菌检出率最高达45.65%,其次为大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、液化沙雷氏菌、产酸克雷伯氏菌,检出率分别为30.19%,27.59%,19.23%,17.39%;结论:ESBLs在肠杆菌科流行严重,分布广,以阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏为主要流行菌株。