简介：近几年在基因治疗的临床试验方面发生了几起病例死亡事件，对基因治疗临床试验的开展产生了巨大的负面影响。有关部门对基因治疗临床试验制定了更为严格的规定，但是一些接受基因治疗试验的患者的良好治疗效果进一步证实了基因治疗的可行性。这些信息告诉我们应该清楚地认识病毒载体和转基因技术对宿主细胞可能产生的多种不同影响。现已证实在转基因治疗中病毒有可能激活插入点附近的原癌基因，因此发现一种不整合人宿主基因或精确定点整合宿主基因的病毒载体显得尤为重要。

简介：摘要目的分析天津市儿童医院急性呼吸道感染的住院患儿中腺病毒和博卡病毒感染的流行病学特征及分子分型。方法收集2019年3月至2020年2月天津市儿童医院1 171份急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物，用腺病毒和博卡病毒感染特异性引物进行PCR扩增，对阳性扩增产物进行核苷酸序列测定，将腺病毒和博卡病毒所测序列在GenBank中进行比对，同时用MEGA7.0.26对腺病毒进行分子分型以及系统进化树分析。对不同年龄段（<6个月、6~11个月、12~23个月、24~35个月、36~47个月、≥48个月）及季节的腺病毒和博卡病毒阳性检出率进行比较分析。结果1 171份标本中分别检出腺病毒30株［阳性率2.56%（30/1 171）］和博卡病毒84株［阳性率7.17%（84/1 171）］。不同年龄段腺病毒和博卡病毒阳性检出率分别在1.02%（4/392）~6.61%（8/121）和4.09%（7/171）~11.45%（26/227）。各年龄段腺病毒和博卡病毒的阳性检出率差异有统计学意义（χ²=12.862，P=0.025；χ²=14.178，P=0.015）。冬季是腺病毒感染的高峰期，阳性率为5.54%（15/271）；秋季和冬季博卡病毒感染的高峰期，阳性率分别为12.00%（36/300）和12.55%（34/271），高于其他两季（χ²=43.753，P<0.05）。不同季节呼吸道腺病毒和博卡病毒阳性检出率差异有统计学意义（χ²=13.287，P=0.004；χ²=43.753，P<0.05）。29株腺病毒序列分别为HAdV-B亚群的HAdV-3、7血清型和HAdV-C亚群的HAdV-1、2、5血清型。结论腺病毒和博卡病毒在小儿呼吸道感染中起重要作用，且与季节、患儿年龄等因素密切相关，应该引起临床重视。

简介：摘要目的分析雾化吸入重组干扰素α1b在儿童呼吸道腺病毒感染治疗中的应用效果。方法收集2017年8月至2018年8月我院收治的呼吸道腺病毒感染患儿40例，随机平分为观察组和对照组，对照组患儿接受常规治疗，观察组患儿在常规治疗的基础上接受雾化吸入重组干扰素α1b进行治疗，比较两组患儿治疗效果、预后效果和不良反应发生率。结果观察组患儿治疗有效率为90.00%，对照组为75.00%，P<0.05；观察组患儿退热时间、咳嗽消失时间和住院时间均明显少于对照组，P<0.05；两组患儿治疗过程中均未见明显不良反应。结论雾化吸入重组干扰素α1b可有效提高儿童呼吸道腺病毒感染的治疗效果，对于改善患儿预后效果具有积极作用，且临床应用无明显不良反应，安全性良好，值得推广应用。

简介：无

简介：背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以AnnexinV-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。

简介：摘要目的了解2015—2019年上海市普陀区急性呼吸道感染主要呼吸道病毒病原特征，并研究腺病毒的基因特征，为呼吸道病毒的防控特别是腺病毒的防控提供实验室依据。方法收集2015—2019年普陀区监测医院内急性呼吸道感染病例的咽拭子标本，使用多重PCR方法进行呼吸道病原体的检测，并对腺病毒阳性标本扩增Hexon基因测序分析。结果共检测775例标本，检出阳性525例，阳性率为64.74%。甲型流感病毒检出率最高，占66.48%（349/525）；其次为乙型流感病毒，占12%（63/525）；腺病毒占5.14%（27/525）；鼻病毒占3.81%（20/525）；肠道病毒占3.24%（17/525）；冠状病毒占3.05% （16/525）；副流感病毒占2.67%（14/525）；人偏肺病毒占2.48%（13/525）；人博卡病毒占0.38%（2/525），呼吸道合胞病毒未检出。27例腺病毒Hexon基因测序分析显示腺病毒3型17例，7型7例，4型2例，5型1例。结论上海市普陀地区急性呼吸道感染以流感病毒为主，腺病毒次之，腺病毒感染以3型和7型为主。

简介：摘要目的基于六邻体蛋白和纤维蛋白的联合基因测序和系统发育分析进行腺病毒性结膜炎中人类腺病毒(HAdV)分型。方法在上海地区收集2015年1月至2017年8月病毒性结膜炎患者下结膜囊结膜拭子样本256份，提取DNA后通过PCR扩增六邻体蛋白及纤维蛋白全长，完成基因测序及种系发生学分析。结果89例(占34.76%)患者结膜拭子六邻体蛋白基因扩增阳性，包括HAdV-C1、HAdV-C2、HAdV-B3、HAdV-E4、HAdV-D8、HAdV-D19和HAdV-D37各1、7、20、6、23、17和15例，分别占1.12%、7.87%、22.47%、6.74%、25.84%、19.10%和16.85%，其六邻体蛋白种系发生学分析中均与相应参考序列原型聚合。纤维蛋白种系发生学分析中，15例HAdV-D19样本序列和1例HAdV-D37样本序列交叉聚合。结论针对六邻体蛋白和纤维蛋白基因的联合测序可以为HAdV分型和毒力分析提供丰富有效的生物学信息。

简介：摘要目的研究2015-2019年上海地区急性呼吸道感染病例中腺病毒感染的流行病学特征和混合感染情况，为腺病毒的防控提供科学依据。方法收集2015-2019年上海地区3家医院内的急性呼吸道感染病例，对纳入病例进行相关信息登记和采样，进行呼吸道病原体的多重PCR检测。结果共纳入1 543例急性呼吸道感染病例，腺病毒阳性率2.92%（45/1 543），流感样病例（ILI）和严重急性呼吸道感染病例（SARI）中的阳性率分别为2.74%（29/1 058）和3.30%（16/485）。ILI在2019年1-5月的阳性率5.43%（7/129）高于2015-2018年同期的0.52%~4.48%（Fisher精确检验值=8.92，P=0.036）。45例腺病毒阳性病例的发病时间主要分布在第一、二季度，合计占62.22%（28/45），各季度发病阳性率的差异有统计学意义（χ2=12.52，P=0.006），以第二季度的阳性率最高（6.03%），高于其他季度的1.89%~2.93%。各年龄组间差异有统计学意义（χ2=16.94，P=0.001），且随着年龄的增加阳性率有降低的趋势（χ2=10.16，P=0.001），13~19岁组的阳性率（9.43%）高于其他年龄组（1.48%~4.81%）；学生组阳性率（12.07%）高于其他职业（2.61%），差异有统计学意义（χ2=11.53，P=0.001）。45例腺病毒阳性病例中混合感染占31.11%（14/45）。ILI和SARI的混合感染率分别为34.48%（10/29）和25.00%（4/16），14例混合感染病例中，腺病毒的主要混合感染病原是甲型流感病毒和冠状病毒。结论上海地区急性呼吸道感染病例中存在一定比例的阳性病例，需进一步加强青少年人群中的腺病毒监测，重点是关注第二季度的学生等重点人群。

简介：摘要目的探讨腺病毒结合蛋白3(BNIP-3)在肝细胞肝癌中的表达与缺氧及相关临床病理因素的关系。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测烟台市烟台山医院2016年11月至2019年8月之间手术的65例肝癌组织、癌边缘组织、非癌组织中BNIP-3和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，分析两者表达的相关性及与相关临床病理参数的关系。不同组织中mRNA表达的差异采用t检验，蛋白表达的差异采用Kruskal-Wallis H检验，BNIP-3和HIF-1α表达之间的相关性及与临床病理参数之间的比较采用Spearman相关性检验。结果肝癌组织与癌边缘组织BNIP-3、HIF-1α mRNA表达显著高于非癌组织，并且两者表达呈正相关(r＝0.638、0.532，P<0.05)，BNIP-3和HIF-1α在癌边缘组织蛋白表达阳性率分别73.8%、64.6%，显著高于癌组织及非癌组织(χ2＝38.587、31.128，P<0.05)。相关性分析发现肝癌组织中BNIP-3蛋白表达与淋巴结转移、癌栓、TNM分期及术后复发时间有关(r＝0.631、0.522、0.541、0.714，P<0.05)，与性别、年龄、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤大小、肿瘤数目、病理分期等无关；肝细胞肝癌(HCC)患者术后无瘤生存时间随癌组织BNIP-3蛋白表达阳性强度增高而延长。结论BNIP-3在肝癌中的表达与缺氧及肝癌复发转移明显相关。

简介：无

简介：摘要目的总结体外膜肺氧合（ECMO）辅助治疗在重症腺病毒肺炎引起的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患儿中应用的临床护理经验。方法回顾性分析20例重症腺病毒肺炎合并ARDS患儿的临床资料，总结归纳其起病、治疗、并发症及预后等病程中的护理重点。结果20例患儿原发病均为重症腺病毒肺炎，ECMO治疗时长247.50（152.00，296.75） h。治疗后12例（12/20）成功脱离ECMO，存活出院11例（11/20），死亡9例（9/20）。ECMO治疗过程中17例（17/20）患儿出现并发症。出院后随访半年至2年，9例生命质量、社会功能良好，精神运动发育正常；2例因缺血、缺氧脑功能损害，于医院或家庭持续康复锻炼中。结论儿童重症腺病毒肺炎合并ARDS病情危重，当其他治疗手段无效后，ECMO治疗可为可逆性心肺衰竭患儿提供心肺支持治疗，但并发症多且严重，预防和减少相关并发症是ECMO辅助成功的关键。

简介：目的构建长链非编冯RNABRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BREAS1的全长目的片段，将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDHCMVMC8EF1分别双酶切后进行连接，转化到感受态大肠杆菌后，通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落，提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒，并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2，分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BREAS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BREAS1全长序列，经过双酶切、连接、转化、筛选及I）NA测序，成功构建重组慢病毒载体质粒pCDH-BRE-AS1。通过荧光显微镜检测，几乎昕有经过嘌呤霉素筛选的OSRC2细胞均具有绿色荧光，显示其被重组慢病毒感染；荧光实时定量PCR显示，感染了RNABRE-AS1慢病毒的OSRC2细胞中，BREAS1的表达水平上升了38．5倍。EdU插入实验显示BREASl抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体，并证明BREAS1能抑制肾癌细胞增殖。

简介：摘要遗传性视网膜变性(IRD)发病机制复杂多样，常常导致不可逆盲，目前尚缺乏有效的治疗方法。近年来，针对IRD的基因治疗显示出广阔的应用前景，而如何将基因药物递送至靶细胞并安全、高效地表达成为目前研究发展的关键点。病毒载体系统转染效率较高，但具有潜在的免疫反应和生物安全等问题，其临床应用的局限性使非病毒载体系统的开发应运而生。DNA纳米复合体是新型非病毒载体的研究热点之一，这种聚合物/DNA复合物纳米粒子由多肽、脂质、多糖等物质压缩和包裹DNA而成，在IRD的应用上取得了较大的进展。此外，非病毒载体在成本、制备难易度、包装容量及安全性上均显示出其优势，为视网膜色素变性、Stargardt病、先天性视网膜劈裂、Leber先天性黑矇等IRD的基因治疗提供了新的研究思路。本文对近年来非病毒载体系统在转染效率、靶向性和安全性等方面的进展及其在IRD基因治疗中的应用进行综述。

简介：摘要腺相关病毒载体（AAV）是目前最重要的病毒工具，已在基因治疗领域得到广泛应用；因其具有体积小、无包膜、无致病性等特点，故而是治疗遗传性视网膜疾病的主要手段之一。目前针对原癌基因酪氨酸激酶基因治疗视网膜色素变性、ND4基因治疗Leber遗传性视神经病变以及Rab伴随蛋白-1基因治疗无脉络膜症的临床试验均发现约一半的患者视力改善。针对AAV基因治疗Leber先天性黑矇、X连锁视网膜劈裂症、全色盲以及老年性黄斑变性的临床试验也正在开展。而关于Stargardt病、Usher综合征、真性小眼球的AAV基因治疗尚在动物实验或理论阶段。目前AAV基因治疗主要用于隐性遗传性视网膜疾病，对于显性遗传性视网膜疾病需采用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9技术等来干预。对于遗传性视网膜疾病的治疗，这将是一个重要且复杂的系统性工程，需投入更多人力物力共同参与和研究，期待在不久的将来能有大的突破。

简介：慢病毒载体（lentivirusvector,LV）是作为目前研究最多的外源性转基因载体之一,在基因转染方面有着许多独特的优势,例如,对细胞是否处于有丝分裂期没有特别的要求,基因转染效率高,可容纳较大基因片段等。本文就慢病毒载体系统的概述、肿瘤的基因治疗、转基因动物模型构建等方面进行综述。

简介：摘要目的利用不同型别呼吸道腺病毒核酸标准品对呼吸道病原体核酸检测试剂进行最低检测限性能评价。方法选择已研制的1、2、3、4、5、7、55型呼吸道腺病毒核酸标准品，参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)的EP17-A2文件，采用Probit回归方法对28种不同方法学原理的呼吸道病原体核酸检测试剂的最低检测限(Lod)进行评估，比较各试剂盒声称Lod和评估Lod之间以及对不同腺病毒型别检测Lod之间的差异。结果28种试剂盒中能够准确评估Lod的比例为50%(12/24)。12种试剂盒的评估Lod与声称Lod一致性较好；12种试剂盒一致性较差，其中4种试剂盒差异较小(measured Lod<5×claimed Lod)，8种试剂盒差异较大(measured Lod>5×claimed Lod)，最大者可达24 000倍。不同试剂间评估的Lod浓度差异可达106数量级以上(最低和最高分别为20拷贝/ml和4.8×107拷贝/ml)；同种试剂对不同型别腺病毒的检测Lod均不相同，其浓度差异最高可达104数量级(最低和最高分别为5.0×103拷贝/ml和4.8×107拷贝/ml)。结论部分呼吸道病原体核酸检测试剂检测腺病毒的最低检测限性能评估缺乏准确性，使用检测范围内的多种病原体型别或亚型进行性能评估尤为必要。

简介：无

简介：肿瘤是一个全身性疾病，综合治疗已成为共识。继手术、放疗、化疗等治疗方法之后，肿瘤的基因治疗逐步应用并且显示了一定的疗效。2007年3月，我院应用重组人p53腺病毒注射液联合顺伯、替加氟治疗舌癌1例，疗效显著。现报告如下。

简介：程序性细胞死亡因子5（programmedcelldeath5,PDCD5）在多种肿瘤细胞中表达明显降低。携带pdcd5基因的靶向增殖型腺病毒SG611-pdcd5对白血病细胞具有杀伤作用,对正常细胞具有相对保护作用。本研究旨在观察联合应用SG611-pdcd5与低剂量化疗药物依托泊甙（etoposide,VP-16）对白血病细胞系K562的作用。以不同浓度梯度的药物或不同感染复数（multiplicityofinfection,MOI）的病毒液作用于K562细胞,培养48小时后用MTT法检测细胞存活率。结果表明,与SG611-pdcd5（MOI=40）或VP-16（0.5μg/ml）单独作用组相比,SG611-pdcd5（MOI=40）＋VP-16（0.5μg/ml）组细胞存活率明显降低（p均〈0.05）,分别为（59.45±4.12）%、（82.91±3.41）%及（42.00±5.75）%。SG611-pdcd5与VP-16的协同作用强于PDCD5蛋白或携带pdcd5基因的非增殖型腺病毒Ad-pdcd5与VP-16的协同作用（p均〈0.05）;VP-16浓度为4.0μg/ml时,VP-16＋SG611-pdcd5（MOI=40）组、VP-16＋proPDCD5（40μg/ml）组及VP-16＋Ad-pdcd5（MOI=80）组细胞存活率分别为（37.09±1.89）%、（52.36±1.64）%及（73.64±4.33）%。结论：SG611-pdcd5具有促进低剂量VP-16杀伤K562细胞的作用,二者联合可增强对白血病细胞的杀伤作用。

简介：目的：明确腺病毒E1A基因对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致肺泡上皮细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）／基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）失衡是否存在影响。方法：将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒组（E1A＋组）和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组（EIA一组），分别以不同浓度的LPS刺激．刺激后12、24h用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞MMP-9mRNA和TIMP．1mRNA的表达，用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测MMP．9和TIMP-1蛋白的表达。结果：在LPS刺激12h后E1A＋组的MMP-9／TIMP-1mRNA比值高于其他2组（P=0．045）：在刺激24h后3组之间的差别更加显著（P=0．032）。MMP-9/TIMP-1蛋白比值在LPS刺激12h后E1A＋组高于其他2组．但无统计学意义（P=0．069），在刺激24h后3组蛋白比值的差别比较显著（P=0．039）。结论：腺病毒EIA基因可导致Ⅱ型肺泡上皮细胞在LPS刺激下大量释放MMP-9．使MMP-9／TIMP-1的失衡进一步加重。